[发明专利]一种乳腺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于新型功能纳米材料、免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种乳腺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及应用。

背景技术

癌症如果能够早期诊断、及时治疗，三分之一的癌症是可以治愈的；血清中各种肿瘤标志物的灵敏测定对癌症的早期诊断起着重要的作用；因此建立快速、灵敏准确检测血清中肿瘤标志物的分析方法成为了当今的研究热点，引起了大家的广泛关注。

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，据有关资料统计，乳腺癌的发病率占全身各种恶性肿瘤的10%，是一种严重影响妇女的身心健康甚至危及生命的常见恶性肿瘤；癌胚抗原（CEA）, 糖类抗原125(CA125)、糖类抗原15-3(CA15-3)等常见的肿瘤标志物，对于乳腺癌的诊断都能起到一定的作用。

夹心型电化学免疫传感器结合了高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术，具有灵敏度高、制备简单、检测快速、成本低等优点，在临床分析、环境监测、食品安全控制、生物监测等领域都有重要的应用价值。

随着纳米技术的发展，各种纳米粒子广泛的应用于传感器的构建过程中。石墨烯表面有大量的羧基官能团，且具有大的比表面积，良好的电子传递能力和催化性能，能有效吸附固载抗体；负载金纳米粒子的石墨烯具有更好的导电性； 银纳米粒子具有很好的催化性能，对苯硫酚功能化磺化碳纳米管不仅具有碳纳米管的优良性能，而且经过磺化、功能化更是大大增加了固载抗体的能力，因此银纳米粒子@对苯硫酚功能化磺化碳纳米管作为检测抗体标记物能够更好的对测定信号实现放大，提高肿瘤标志物检测的灵敏度。

发明内容

本发明提供了一种乳腺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及应用，实现了对乳腺癌肿瘤标志物的超灵敏检测。

本发明的目的之一是提供一种乳腺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将所制备的一种乳腺癌肿瘤标志物免疫传感器，用于乳腺癌肿瘤标志物的检测。

本发明的技术方案，包括以下步骤

1. 一种乳腺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，步骤如下：

（1）将直径为3~5mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2）取6µL、0.5 ~ 2.0mg/mL的负载金纳米粒子石墨烯滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；

（3）继续将6 µL、5~ 15 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 ℃冰箱中干燥；

（4）继续将3 µL、1~ 2 mg/mL的BSA溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；滴加6 µL、0.001 ~ 30 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中干燥；

（5）将6 µL、1~ 3 mg/mL的银纳米粒子@对苯硫酚功能化磺化碳纳米管检测抗体Ab₂孵化物溶液，滴涂于电极表面，置于4℃冰箱中晾干，制得一种乳腺癌肿瘤标志物免疫传感器。

2.一种乳腺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，所述相关材料的制备，包括以下几个步骤：

（1）负载金纳米粒子石墨烯的制备

①氨基化石墨烯的制备

取40 ~ 60mg氧化石墨烯溶解在10mL的无水甲苯中，加入0.2mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，油浴加热至60 ~70^˚C，磁力搅拌1.5h，后在110^˚C下烘干得到氨基化石墨烯；

②金纳米粒子溶液的制备

将1~ 2mL、质量分数为1%的 HAuCl₄加入到99mL超纯水中，加热至沸腾加入1.5~3.5mL、质量分数为1%的柠檬酸钠溶液，回流15 ~ 30min，后冷却至室温，得到酒红色的金纳米粒子溶液；

③负载金纳米粒子的石墨烯的制备

取20~ 30mg氨基化石墨烯加入到上述步骤②制得的金纳米粒子溶液中，振荡12h，制得负载金纳米粒子石墨烯；

（2）银纳米粒子@对苯硫酚功能化磺化碳纳米管检测抗体Ab₂孵化物溶液的制备

①磺化碳纳米管的制备