[发明专利]一种烟曲霉素的提取方法

说明书

本发明提供一种烟曲霉素的提取方法，包括步骤：1)将烟曲霉素发酵液的pH值调节为1～6.0，用大孔树脂吸附；2)吸附后的树脂置于层析柱中，用质量浓度15～30％的乙醇水溶液清洗；3)用无水乙醇或质量浓度50～98％的乙醇水溶液洗脱树脂，洗脱液经浓缩和干燥，得到烟曲霉素粗提品。本发明提出的提取方法，避免了传统工艺中的多种溶剂萃取、反萃等工序，操作可靠性高且简便，生产过程安全无污染、资源利用率高，生产成本低，又有利于环境保护，是一种绿色环保的提取烟曲霉素的方法。

技术领域

本发明属于抗生素生产领域，具体涉及一种从发酵液中提取抗生素的方法。

背景技术

烟曲霉素(Fumagillin)由烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的发酵培养液中分离得到具有多种活性的一种代谢产物。其结构式为：

这种物质具有抗生素活性，又有抑制血管生成作用，从而具有对肿瘤生长的治疗作用。此外，烟曲霉素的一系列衍生物还具有抗击疟原虫和孢子虫的作用。在养蜂业中烟曲霉素的是非常有效的治疗西方蜜蜂孢子虫病(Nosema apis)的药物，在美国和加拿大等国家已经使用有近60年的历史。近些年研究显示，烟曲霉素还是潜在减肥药物，是治疗肥胖的有效药物。作为一种具有多种活性的药物，烟曲霉素在未来的使用更加广泛。因此，建立简单有效的烟曲霉素的提取和净化方法，制备烟曲霉素纯品，对于该药物的深入研究和利用有着重要的意义。

由于烟曲霉素结构复杂，用有机合成的方法成本高，因此，目前烟曲霉素大多数从烟曲霉素的发酵液中提取和纯化获得。之前的专利和文献中主要使用液液萃取的方法来从发酵液中提取烟曲霉素，提取过程中大量使用二氯甲烷或氯仿，叔丁醇，丙酮和乙酸乙酯等有毒试剂，同时提取过程中大量的副产物比如高毒的胶霉毒素等需要经过重结晶等方法除去，步骤繁琐，不易控制。随着人们对环境保护和人体健康的认识，通过优化提取方法，使用低毒、低污染的方法来提取药物成为药物提纯的趋势。大孔树脂提取作为一种有效的提取方法，已经广泛的应用到活性物质和药物提取和纯化中。

发明内容

针对现有技术的不足之处，本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单，宜于工业化生产的烟曲霉素提取方法。

实现本发明上述目的的技术方案为：

1、一种烟曲霉素的提取方法，包括步骤：

1)将烟曲霉素发酵液的pH值用盐酸、硫酸、磷酸中的一种调节为1～6.5，用非极性大孔树脂或弱极性大孔树脂吸附，所用大孔树脂的孔径为比表面积为100～1200m²/g，大孔树脂使用前用乙醇和水活化；

2)吸附后的树脂置于层析柱中，用质量浓度15～30％的乙醇水溶液清洗；

3)用无水乙醇或质量浓度50～98％的乙醇水溶液洗脱树脂，洗脱液经浓缩和干燥，得到烟曲霉素粗提品。

大孔树脂使用前的活化是用无水乙醇浸没树脂浸泡20～30h，再用3倍的水清洗。

作为本发明优选技术方案之一，所述步骤1)中，向烟曲霉素发酵液的pH值调节为1～6.0，加入大孔树脂，发酵液和大孔树脂的体积质量比为15～20mL：1g；；搅拌后过滤，过滤得到的树脂用水清洗。

或，所述步骤1)中，将烟曲霉素发酵液离心，分离出上清液，将上清液的pH值调节为1～6.0，活化后的树脂置于层析柱中，上清液以0.5～3倍床层体积/小时的速度流过层析柱。

其中，所述层析柱的高径比为1～10。

进一步地，所述大孔树脂的型号为D101，XAD-2，HP-20，SP825，SP850或SP700。

其中，所述步骤2)中乙醇水溶液流过层析柱的速度为0.5～3倍床层体积/小时。