[发明专利]间日疟原虫烯醇化酶的制备及其应用

权利要求书

1.一种间日疟原虫烯醇化酶的制备，其特征是，包括以下步骤：

（1）扩增间日疟原虫烯醇化酶（enolase）基因：提取间日疟原虫基因组，采用引物P2和 引物P3扩增第一段enolase基因，然后再以第一段enolase基因为模版，以引物P1和引物P3 扩增出enolase基因；

（2）构建pET28α/enolase表达载体：

a、纯化步骤（1）得到的enolase基因；

b、将pET28α质粒酶切、提纯得到线性化的pET28α质粒载体；

c、将线性化的pET28α质粒载体和enolase基因连接，得到pET28α/enolase表达载体；

（3）重组enolase蛋白表达和纯化：将pET28α/enolase表达载体转化到BL-21（DH3） pLys感受态细菌上，培养后的细菌进行诱导、纯化。

2.如权利要求1所述的间日疟原虫烯醇化酶的制备，其特征是：所述引物P1为5’- cggccatatggcccacgtaattactcgtatttctgcccgtgaaattttgg-3’；所述引物P2为5’- gtatttctgcccgtgaaattttggactcccgaggaaacccaaccg-3’；所述引物P3为5’- agcagcggccgctcaacttaattggtgcctaaatttctc-3’。

3.如权利要求1所述的间日疟原虫烯醇化酶的制备，其特征是：所述步骤（1）扩增过程 为：94℃、4min；94℃、30sec；50℃、30sec；72℃、1.5min，共30个循环；72℃、7min；4℃、12 min。

4.如权利要求1所述的间日疟原虫烯醇化酶的制备，其特征是：所述纯化enolase基因 具体为：使用PCR产物纯化试剂盒提纯步骤（1）得到的enolase基因后，以限制性内切酶Nde I和NotI进行酶切提纯，经1%琼脂糖凝胶电泳后，用AgaoseGelExtractionKit提纯。

5.一种间日疟原虫烯醇化酶体内抑制疟原虫生长并保护宿主的应用。