[发明专利]分泌抗马铃薯S病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用

说明书

本发明公开了一种分泌抗马铃薯S病毒(PVS)单抗杂交瘤细胞株及其单抗的应用。利用差速离心法提纯的PVS病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能稳定传代并分泌抗PVS单抗的杂交瘤细胞株16C10，其保藏号为CGMCC No.12002。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10^‑7，抗体类型及亚类为IgG1、kappa轻链，该单抗与34kDa的PVS外壳蛋白亚基有特异反应。利用16C10单抗建立检测马铃薯植株中PVS的ACP‑ELISA、dot‑ELISA和Tissue blot‑ELISA检测方法，其中ACP‑ELISA和dot‑ELISA方法检测病叶的灵敏度分别达到1:81920和1:10240倍稀释(w/v,g/mL)。抗PVS单抗的制备及其检测方法的建立为该马铃薯病毒病的诊断和检测、流行病学分析及科学防控提供物质和技术支撑。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分泌抗马铃薯S病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单抗的应用。

背景技术

马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)也称作马铃薯潜隐病毒，是危害马铃薯的主要病毒之一，该病毒属于乙型线型病毒科(Betaflexiviridae)麝香石竹潜隐病毒属(Carlavirus)的成员。PVS在1948年首次报道于荷兰，随后在世界各马铃薯种植地区皆有报道，且其分布十分广泛。目前在我国北方的内蒙古、黑龙江、辽宁、河北、山东、青海以及南方的广西、湖南、四川、浙江、福建、贵州等地均被发现，为给马铃薯的生产造成了严重的损失。PVS在大多数马铃薯品种上可引起叶脉颜色变深、叶片粗缩、叶尖下卷、叶色变浅；有的马铃薯品种感病后产生轻度斑驳、脉带；有的品种感病后期变成青铜色，严重皱缩，叶面产生小的坏死斑，甚至落叶。研究发现该病毒可以通过汁液接触和蚜虫介体传播到茄科和藜科植物上，且该病毒常常与其他病毒复合侵染马铃薯造成更为严重的危害。PVS的基因组全长8.4-8.5kb，包含六个开放阅读框(ORF)，其中ORF 5编码一个34kDa的外壳蛋白(CP)。通过电镜观察纯化的病毒粒子发现该病毒为直径为10-15nm，长约610-700nm的弯曲线状病毒。

为了调查我国马铃薯上PVS的发病情况、强化我国马铃薯S病毒病检测和诊断技术及科学指导防控，急需建立检测PVS经济、高通量的检测技术。目前，对PVS的检测和诊断多采用低效率的指示植物、电镜观察、RT-PCR等方法进行小样本检测。本发明以纯化的PVS病毒粒子作为抗原通过杂交瘤技术制备了1株分泌抗PVS的特异性单抗的杂交瘤细胞株，以分泌的单抗为核心建立检测PVS的高通量的血清学方法及试剂盒，从而为我国马铃薯S病毒的检测和诊断、流行病学的调查、无毒种薯的生产、病毒基因组功能的分析及其科学防控体系的建立提供物质和技术支持。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种分泌抗马铃薯S病毒单抗的杂交瘤细胞株及其单抗应用。

分泌抗马铃薯S病毒单抗的杂交瘤细胞株16C10，它能分泌抗马铃薯S病毒的特异性单抗，杂交瘤细胞株16C10于2016年1月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.12002。

一种所述的杂交瘤细胞株分泌的抗马铃薯S病毒单抗，抗马铃薯S病毒单抗腹水间接ELISA效价达10^-7，抗体类型及亚类为IgG1、kappa轻链，该单抗与马铃薯S病毒34KDa的外壳蛋白有特异性免疫反应，利用ACP-ELISA和dot-ELISA方法分析发现单抗检测感染PVS病叶的灵敏度分别达到1:81 920和1:10 240倍稀释(w/v,g/mL)。

抗马铃薯S病毒单抗能与马铃薯S病毒有特异性反应，而不与马铃薯A病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯卷叶病毒和健康的马铃薯叶片粗提液反应。

抗马铃薯S病毒单抗在该病毒检测上的应用是以单抗为核心建立的各种免疫学检测方法及免疫学试剂盒。