[发明专利]苛求芽孢杆菌尿酸酶突变体V145A

说明书

苛求芽孢杆菌胞内尿酸酶协同突变体A2R/V145A、V145A/Y320R、V145A/Y320H、A2R/V145A/Y320R、A2R/V145A/Y320H；所述协同突变体对应野生型尿酸酶来自中国发明专利CN 101875922所述氨基酸序列；与野生型尿酸酶相比，在生理条件下协同突变体V145A/Y320R、V145A/Y320H、A2R/V145A/Y320R、A2R/V145A/Y320H热失活过程不符合指数衰减模型，在热失活初期6天内活性基本保留在90％以上，其后酶活性才基本呈指数衰减。

技术领域

本发明属于酶生物技术领域，公开了苛求芽孢杆菌尿酸酶突变体V145A及其多位点协同突变体；相对于中国发明专利ZL 200910103741.1中公开的野生型苛求芽孢杆菌尿酸酶，此突变体及其协同突变体在pH9.2时的催化活性或/和生理条件下的热稳定性有提高。

背景技术

尿酸酶可特异性氧化尿酸为尿囊素和过氧化氢，是临床检验等领域测定血清尿酸的重要工具酶，也是临床治疗肿瘤溶解综合症(TLS)、痛风及其它高尿酸血症相关疾病的药用酶。

高活性和稳定的野生型尿酸酶或其突变体有更重要的应用价值。

野生型苛求芽孢杆菌尿酸酶有良好的稳定性及较高的活性，适合用于血清尿酸测定，但作为治疗用酶还需显著提高活性和热稳定性，尤其是生理条件下的热稳定性。

本发明设计并筛选获得苛求芽孢杆菌尿酸酶突变体V145A及其多位点协同突变体，其活性比野生型苛求芽孢杆菌尿酸酶均有提高，而协同突变体同时有更高热稳定性。

发明内容

本发明设计与中国发明专利ZL 200910103741.1中公开的野生型苛求芽孢杆菌胞内尿酸酶相比，活性或/和热稳定性更好的突变体。

所述尿酸酶突变体以苛求芽孢杆菌野生型尿酸酶为亲本。

此野生型尿酸酶序列见中国发明专利ZL 200910103741.1，公开号CN 101875922。

所述尿酸酶突变体具体包括以下六种：

1、突变体V145A，野生型尿酸酶第144位缬氨酸突变为丙氨酸。

突变体V145A氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2、协同突变体A2R/V145A，据突变体V145A将第2位的丙氨酸突变为精氨酸。

协同突变体A2R/V145A氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3、协同突变体V145A/Y320R，据突变体V145A将第320位酪氨酸突变为精氨酸。

协同突变体V145A/Y320R氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4、协同突变体V145A/Y320H，据突变体V145A将第320位酪氨酸突变为组氨酸。

突变体V145A/Y320H氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

5、协同突变体A2R/V145A/Y320R，据协同突变体A2R/V145A将第320位酪氨酸突变为精氨酸。

协同突变体A2R/V145A/Y320R氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

6、协同突变体A2R/V145A/Y320H，据协同突变体A2R/V145A将第320位的酪氨酸突变为组氨酸。

协同突变体A2R/V145A/Y320H氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

本发明的有益效果：

表1比较野生型尿酸酶及其突变体在pH 9.2的活性及生理条件下稳定性