[发明专利]多肽固相合成基质及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽固相合成基质，属于多肽/蛋白质合成技术领域。

背景技术

小分子肽合成是蛋白质和多肽化学中的一个很活跃的领域，基本合成方法可分为 液相合成和固相合成两大类。固相法是RobertBruceMerrifield在1963年提出的，现 在称之为固相肽合成(SPPS)，是肽化学的一个重大突破。与传统的液相工艺相比，固相 法具有很多优势，例如缩短了生产周期，且通常具有较高的得率和纯度。它在许多肽类 药物研究的进程中起到重要作用。随着新缩合方法和新型树脂的出现，固相法的整体效 率普遍地提高。

在固相合成中，具有优良性能的载体往往是成功的关键，带有各种连接功能基的低 交联聚苯乙烯-二乙烯基苯树脂化学性质稳定，溶胀率适度，热稳定性和机械性能较好， 是目前国内外最广泛使用的固相载体，而这其中又以Wang树脂的使用较为广泛。

传统的Wang树脂多以聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物(PS)为骨架，通过氯甲基化制 得氯甲基化聚苯乙烯树脂(Merridield树脂，PS-CH₂-Cl)，再通过与对羟基苯甲醇的反 应引入功能基团(LuGS,etal.J.Org.Chem.1981,46,3433-3436)。但是目前这样的树脂 有以下的缺点：1)合成原料氯甲基化的聚苯乙烯反应中要用到强致癌的氯甲醚为原料 (RolandLD,etal,Chemistry.&Industry,1993,4(1):10)；2)氯甲基化反应中会伴随氯甲 基的多取代和二次交联，会影响到树脂的性能(BarrettJ,etal,US3812061,1997)；3)在 后续和对羟基苯甲醇的反应中，传统的合成方法都要用到甲醇钠，由于甲氧基的强亲核 能力，易取代活性氯而发生副反应(LuGS,etal.J.Org.Chem.1981,46,3433-3436)，进 而影响固相载体在后续固相合成反应中的负载率。

发明内容

目的：为解决现有技术的不足，本发明提供一种多肽固相合成基质，提供一种固相 合成基质；利用该固相合成基质可以更好的合成多肽。

技术方案：为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种多肽固相合成基质，其特征在于，所述固相合成基质是以BVA化合物制备的， 所述BVA化合物选自式I、式II、式III中的一种或几种；

1,3-双对乙烯苄氨基丙烷1,4-bis(4-vinylbenzyl-amino)propane，简称为BVAPro；

1,3-双对乙烯苄氨基丁烷1,4-bis(4-vinylbenzyl-amino)butane，简称为BVAB；

1,3-双对乙烯苄氨基戊烷1,4-bis(4-vinylbenzyl-amino)pentane，简称为BVAPen； 所述的多肽固相合成基质，其特征在于：通过BVA化合物与苯乙烯共聚制备而成，制备 过程选自：

(a)在含聚乙烯醇的水溶液中加入苯乙烯、BVA化合物、和过氧化苯甲酰，搅拌后保 温于0～90℃(优选为50～65℃，最优选为60℃)，再过滤，洗涤，干燥，筛分选得粒径 为50～250目(优选为100～200目)的微球；然后，向微球加入二氯甲烷溶胀，再加入 1,4-二氯甲氧基丁烷并滴加无水四氯化锡进行反应，之后抽滤，洗涤，干燥；然后加入 二甲基乙酰胺溶胀，搅拌，再加入含对羟基苯甲醇的二甲基乙酰胺溶溶液和甲醇钠，在 N₂保护下，在40～60℃(优选为45～55℃，最优选为50℃)下搅拌反应，过滤，洗涤， 干燥，由此制备获得固相合成基质；

(b)在含聚乙烯醇的水溶液中加入苯乙烯、BVA化合物、和过氧化苯甲酰，搅拌后保 温于0～90℃(优选为50～65℃，最优选为60℃)，再过滤，洗涤，干燥，筛分选得粒径 为50～250目(优选为100～200目)的微球；然后，向微球加入二氯甲烷溶胀，再加入 含三氯化铁的硝基苯溶液和N-氯甲基邻苯二甲酰亚胺，于40～50℃(优选为45℃)反应， 抽滤，洗涤，再加入水合肼的甲醇溶液回流，再抽滤，洗涤，干燥；然后加入二甲基甲 酰胺中溶胀，再加入含Fmoc-RinkerLinker、N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、HOBT、和 DIEA的二甲基甲酰胺溶液，在N₂保护下反应，再抽滤，洗涤，干燥，由此制备获得固 相合成基质；