[发明专利]一种DC细胞培养方法及培养基

说明书

本发明涉及一种DC细胞培养方法及培养基。所述培养基含有重组人转铁蛋白、重组人胰岛素、GM‑CSF、IL‑4、IL‑15、黄体酮、人血白蛋白和基础培养基。所述DC细胞培养方法，使用本发明DC细胞培养基和包被有CD28单抗的培养容器培养PBMC。本发明提高了DC细胞的增殖倍数，极大提高了培养出的DC细胞的纯度。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，尤其涉及一种DC细胞培养方法及培养基。

背景技术

DC细胞是一类与粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞形态和功都不同的白细胞，因其细胞膜向外伸出，形成与神经细胞轴突相似的膜性树状突起，故而命名为树突状细胞(dendritic cells，DCs)。它是机体功能最强的专职抗原递呈细胞(Antigen presentingcells,APC)，能高效地摄取、加工处理和递呈抗原。未成熟DC细胞具有较强的迁移能力，成熟DC细胞能有效激活初始型T细胞，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节。在已知的APC中，DC细胞的抗原提呈功能最强，大部分的杀伤性T细胞都需要靠DC细胞去识别抗原，并加工处理后呈递上去。

成熟的DC细胞可用于治疗癌症以及其他疾病。但是DC细胞难于扩增，数量不足成为应用的一大限制。如何获得足够数量的DC细胞是现在研究领域的热门。现有技术最好的方案是采用life公司的AIM V培养基添加50ng/ml IL-4(白细胞介素-4)和50ng/ml GM-CSF(粒细胞和巨噬细胞集落刺激因子)培养获得DC细胞。但该种方法获得的DC细胞并不理想，DC细胞几乎不扩增。

发明内容

有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种提高DC细胞扩增倍数的DC细胞培养方法和培养基。

一种DC细胞培养基，含有基础培养基、重组人胰岛素、GM-CSF、IL-4、IL-15(白细胞介素-15)、黄体酮、重组人转铁蛋白和人血白蛋白。

优选地，基础培养基为DMEM培养基。

优选地，所述DC细胞培养基各组分含量如下：

优选地，所述DC细胞培养基各组分含量如下：

一种DC细胞培养方法，使用本发明DC细胞培养基和包被有CD28单抗的培养容器培养PBMC。CD28单抗可以促进DC细胞的分化和增殖，而采用包被的方式不仅可以减少CD28的用量，还可以使得细胞和CD28以及其他细胞因子的接触更加充分。

优选地，所述DC细胞的培养方法包括以下步骤：

S1、自10ml血液中提取PBMC，按照PBMC密度1×10⁶cells/ml添加含有10％FBS的DMEM/F12培养基将细胞混匀，然后将其加入到包被有CD28单抗的培养瓶中，在37℃、5％CO₂条件中培养3小时；

S2、弃去未贴壁细胞，用PBS冲洗一次，然后加入10ml本发明DC细胞培养基；两天后加入10ml本发明DC细胞培养基；之后每隔2-3天换液一次；

S3、培养到第10天时加入50ng/ml TNF-α刺激DC细胞成熟，第13天时收集成熟DC细胞。

优选地，CD28单抗包被培养瓶的方法为：用含有0.1μg/mlCD28单抗的PBS包被培养瓶1小时，弃去包被液，用PBS清洗2遍。

优选地，所述血液为外周血或脐血。

优选地，步骤S2中每次换液体积不超过30ml。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：