[发明专利]一种新生仔猪睾丸生殖干细胞的高效获取方法

权利要求书

1.一种新生仔猪睾丸生殖干细胞的高效获取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、通过胰蛋白酶和胶原蛋白酶的两步酶消化法获得新生仔猪的睾丸组织单细胞悬 液；

(2)、利用差速贴壁法使睾丸组织中贴壁能力强的成纤维类的细胞贴壁而被去除；

(3)、差速贴壁5次以上，收集未贴壁细胞，所述未贴壁细胞中含有淋巴细胞、红细胞和 生殖干细胞；

(4)、利用Percoll密度梯度离心方法将密度不同的淋巴细胞和红细胞与生殖干细胞分 离，即得纯的生殖干细胞。

2.根据权利要求1所述的新生仔猪睾丸生殖干细胞的高效获取方法，其特征在于，步骤 (1)中所述胰蛋白酶的浓度为0.25wt％，所述胶原蛋白酶的浓度1mg/mL。

3.根据权利要求1所述的新生仔猪睾丸生殖干细胞的高效获取方法，其特征在于，步骤 (2)中所述差速贴壁法中所用的多聚赖氨酸的浓度为0.1mg/ml。

4.根据权利要求1所述的新生仔猪睾丸生殖干细胞的高效获取方法，其特征在于，步骤 (3)中所述差速贴壁的次数为5次。

5.根据权利要求1所述的新生仔猪睾丸生殖干细胞的高效获取方法，其特征在于，步骤 (4)中所述密度梯度离心方法为：配置20％和40％两个梯度的Percoll离心液，底层加入 40％Percoll液，上层加入20％的Percoll液，离心后，生殖干细胞处于40％Percoll液顶部， 而红细胞离心后处于离心管底部，淋巴细胞在20％Percoll液面顶部。

6.根据权利要求1～5任一项所述的新生仔猪睾丸生殖干细胞的高效获取方法，其特征 在于，步骤(1)中所述睾丸组织为去掉了脂肪垫白膜和结缔组织的睾丸组织。

7.根据权利要求1～5任一项所述的新生仔猪睾丸生殖干细胞的高效获取方法，其特征 在于，所述新生仔猪为1～5天的新生仔猪。