[发明专利]一种用于伏马毒素B1灵敏检测的磁控比率荧光适配体传感器的制备方法

权利要求书

1.一种用磁控比率荧光适配体传感器检测伏马毒素B1的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、发射绿色荧光的水溶性CdTe量子点gQDs水溶液和发射红色荧光的水溶性CdTe量子点rQDs水溶液的制备；

步骤2、单分散SiO₂纳米球分散液的制备；

步骤3、Fe₃O₄@SiO₂磁珠mSiO₂分散液的制备；

步骤4、gQDs包覆的SiO₂SiO₂@gQDs分散液纳米球的制备：取步骤2制备的SiO₂纳米球分散液和0.02M NaCl溶液溶解的聚二烯丙基二甲基氯化铵PDDA溶液于烧杯中混合均匀，磁力搅拌反应；产物经离心分离、洗涤后，再加入步骤1中制备的gQDs水溶液，于避光条件下磁力搅拌反应，经离心分离、洗涤后，避光自然干燥，将干燥后的产物分散到蒸馏水中，得到SiO₂@gQDs分散液，备用；

步骤5、rQDs包覆mSiO₂纳米球mSiO₂@rQDs分散液的制备：取用步骤3中制备的mSiO₂分散液，向其中加入聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液，机械搅拌反应；将产物磁性分离，二次水洗3次后，加入二次水将其重新分散，制得聚二烯丙基二甲基氯化铵修饰的mSiO₂(简称为mSiO₂-PDDA)；最后，加入rQDs水溶液机械搅拌，经磁性分离，二次水洗后，避光自然干燥，将干燥后的mSiO₂@rQDs分散在二次水中，得到mSiO₂@rQDs分散液，备用；

步骤6、SiO₂@gQDs标记的Aptamer SiO₂@gQDs-Aptamer荧光探针分散液的制备：取步骤4制备的SiO₂@gQDs分散液，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液和N-羟基丁二酰亚胺NHS水溶液，振荡反应，随后加入Aptamer储备液，振荡孵育过夜，反应完毕后，离心洗涤产物，将产物重新分散在Tris-HCl溶液中，得到SiO₂@gQDs-Aptamer分散液，备用；

步骤7、mSiO₂@rQDs标记的Aptamer的互补链cDNA mSiO₂@rQDs-cDNA磁性-荧光探针分散液的制备：取步骤5制备的mSiO₂@rQDs的分散液，加入EDC水溶液和NHS水溶液，振荡反应，加入cDNA，振荡孵育过夜，反应完毕后，离心洗涤产物，将产物重新分散在Tris-HCl溶液中，得到mSiO₂@rQDs-cDNA分散液，备用；

步骤8、传感器的构建及样品的检测，包括磁控-比率荧光-靶向纳米生物复合物的制备：取步骤6制备的SiO₂@gQDs-Aptamer荧光探针分散液和步骤7制备的mSiO₂@rQDs-cDNA磁性-荧光探针分散液混合，进行第一次恒温振荡孵育，制得mSiO₂@rQDs-cDNA/Aptamer-gQDs@SiO₂纳米生物复合物，对产物mSiO₂@rQDs-cDNA/Aptamer-gQDs@SiO₂纳米生物复合物磁性分离、洗涤后，重新分散在Tris-HCl缓冲溶液A中，备用；

对FB1标准品进行检测，建立标准曲线：取所制备的mSiO₂@rQDs-cDNA/Aptamer-gQDs@SiO₂纳米生物复合物与FB1溶液混合，进行第二次恒温振荡孵育；经磁性分离后，弃去已脱附的SiO₂@gQDs，将收集得到的mSiO₂@rQDs-cDNA/Aptamer-gQDs@SiO₂纳米生物复合物洗涤后，重新分散在Tris-HCl缓冲溶液B中，设置激发波长为365nm，扫描得到荧光谱图，通过荧光强度比(I_g/I_r)/(I_g/I_r)₀与FB1标准品浓度之间的对应关系建立标准曲线，其中，(I_g/I_r)和(I_g/I_r)₀分别为存在与不存在FB1时，磁性收集的mSiO₂@rQDs-cDNA/Aptamer-gQDs@SiO₂纳米生物复合物所测得的gQDs荧光强度和rQDs荧光强度的比值；

步骤9、对待测样品按照步骤8同样的方法进行检测，依据步骤8得到的标准曲线得出检测数据。