[发明专利]一种猪笼草离体快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及猪笼草离体培养及快繁的方法，属于植物组织培养技术领域。

背景技术

猪笼草又称猪仔笼、雷公壶等，是猪笼草科猪笼草属多年生草本或半木质 化藤本植物，原产于亚洲东南部和大洋洲北部，全世界约有67种，虽然在我国 海南和广东的湛江、珠海、中山等部分地区分布，但很少应用。直到20世纪 90年代以后，引进中国的猪笼草的优良品种才主要用于花卉展览。

猪笼草现已成为引人注目的观赏植物，其中由叶片变化而来的笼状变态叶 造型独特，同时具有食虫特性，奇趣无比，是环保灭虫的绝佳选择，也是目前 食虫植物中最受人们青睐的种类之一。其大小和颜色各不相同，有的像小酒 杯、有的像罐子，颜色五彩缤纷，具有极高的观赏价值，常用作盆栽或吊盆观 赏，优雅别致，观赏价值高。

但由于猪笼草雌雄异株，结实率低，且种子萌发慢，发芽率低，扦插繁殖 生根慢，不易成活，难以满足生产的要求。因此，以猪笼草的顶芽或腋芽为试 验材料，控制好灭菌时间和使用改良培养液，以离体组织培养的方法提高其培 养速度并获得大量栽培苗，可为满足种苗市场需要提供一条有效途径。

发明内容

为解决现有猪笼草采用种子繁殖，萌发速度慢，发芽率低；采用扦插繁 殖，生根速度慢，不易成活等问题，本发明提供一种猪笼草离体快繁方法。

本发明的技术方案如下：

一种猪笼草离体快繁方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)外植体的选择与处理

选择生长健壮的猪笼草植株，以顶芽或带侧芽的茎段为外植体，剪取外植 体前4-5天用75％百菌清可湿性粉剂800倍液喷洒全株植株，并对预选取为外 植体的植株部分用透明袋套袋；剪取长度为3～5cm的外植体用流水冲洗，去除 表面污垢后，用体积分数为75％的酒精表面消毒30s；然后先放入质量浓度为 0.1％的氯化汞溶液中消毒15min，再放入混合液中消毒20min，再用无菌水冲洗 3～4次；所述混合液为每100ml质量浓度为2％的次氯酸钠溶液中滴加2滴吐温 -20；

(2)诱导培养

将步骤(1)经处理的外植体接种到MS改良培养液+6-BA1.5～2.0mg/L+NAA 0.1～0.2mg/L+蔗糖30000mg/L+琼脂6250mg/L,pH为5.8～6.0的培养基中, 在光照强度为1500～2000lx,温度25℃±2℃，光照时间为10～12h/d的培养条 件下，培养7d后转接到1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭0.05g/L+蔗 糖30000mg/L+琼脂6250mg/L,pH为5.8～6.0的培养基中，在前述相同的培养 条件下培养至外植体萌发分化出2.5～3.0cm高的幼芽；所述MS改良培养液 为：常规MS培养液中大量元素的浓度减半，盐酸硫胺素浓度为2mg/L,盐酸吡 哆醇浓度为1mg/L的培养液；

(3)继代培养

将步骤(2)所述分化出2.5～3.0cm高的幼芽切成单株，并切除顶芽后， 转接到1/2MS+6-BA2.5～3.0mg/L+NAA0.1～0.2mg/L+活性炭0.05g/L+蔗糖 30000mg/L+琼脂6250mg/L,pH为5.8～6.0的培养基中，在与步骤(2)相同的 培养条件下，培养30～35d转接到1/2MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L+椰子汁 100ml/L+蔗糖30000mg/L+琼脂6250mg/L,pH为5.8～6.0的培养基中，在与步 骤(2)相同的培养条件下培养30-35天；

(4)生根培养

将步骤(3)中长度为2cm以上的芽，接种到盛有1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30000mg/L+琼脂6250mg/L,pH为5.8～6.0生根培养基的培养瓶 中，再将培养瓶移至覆盖有遮光率为70％遮阳网，棚内温度为18～28℃的大棚 苗床上培养至长出3～5条根；

(5)组培苗移栽及管理

将步骤(4)生根的组培苗取出，清水洗净，放入质量浓度为0.1％的多菌 灵溶液中消毒1～2min后，移栽至盛有珍珠岩，草炭和树皮的育苗袋中，珍珠 岩：草炭：树皮的体积比为1：1：1，再将育苗袋置于棚内温度为18～28℃， 空气相对湿度保持在60％以上的大棚内培养40～45d后，即得猪笼草营养钵 苗。

本发明具有下列优点和效果：