[发明专利]水稻锌指蛋白基因ZFP214的基因工程应用

权利要求书

1. cDNA序列如SEQ ID NO. 1所示的锌指蛋白基因ZFP214的耐旱性基因工程应用，其特征在于过量表达该基因，能够提高水稻的耐旱性。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于将针对锌指蛋白基因ZFP214的过量表达载体导入水稻，提高锌指蛋白基因ZFP214的表达，能够提高水稻的耐旱性。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的针对锌指蛋白基因ZFP214的过量表达载体通过以下方法构建：根据SEQ ID NO. 1所示的锌指蛋白基因ZFP214的基因序列，以重组质粒pMD18T-ZFP214为模板，设计引物ZFP214OEF：SEQ ID NO.6和ZFP214OER：SEQ IDNO.7，通过PCR扩增ZFP214基因全长；利用KpnⅠ与PstⅠ将ZFP214全长正向插入植物双元表达载体pCAMBIA1300s的CaMV 35S启动子下游，获得针对锌指蛋白基因ZFP214的过量表达载体pCAMBIA1300s-ZFP214。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的质粒pMD18T-ZFP214通过以下方法获得：

（1）提取水稻总RNA，以提取的水稻总RNA为模板反转录合成cDNA第一链；

（2）以F1：SEQ ID NO.2和R1：SEQ ID NO.3为上下游引物，以反转录合成的 cDNA为模板，通过PCR扩增ZFP214基因全长；通过TA-克隆系统将ZFP214基因片段连接到pMD18-T载体，获得重组质粒pMD18T-ZFP214。

5.针对cDNA序列如SEQ ID NO. 1所示的锌指蛋白基因ZFP214的过量表达载体在构建具有抗旱能力的转基因作物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于将针对锌指蛋白基因ZFP214的过量表达载体导入水稻，通过锌指蛋白基因ZFP214在水稻中的过量表达，提高水稻的耐旱性。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述针对锌指蛋白基因ZFP214的过量表达载体通过以下方法构建：

（1）提取水稻总RNA，以提取的水稻总RNA为模板反转录合成cDNA第一链；

（2）以F1：SEQ ID NO.2和R1：SEQ ID NO.3为上下游引物，以反转录合成的 cDNA为模板，通过PCR扩增ZFP214基因全长；通过TA-克隆系统将ZFP214基因片段连接到pMD18-T载体，获得重组质粒pMD18T-ZFP214；

（3）以重组质粒pMD18T-ZFP214为模板，以ZFP214OEF： SEQ ID NO.6和ZFP214OER：SEQID NO.7为上下游引物，通过PCR扩增ZFP214基因全长；利用KpnⅠ与PstⅠ将ZFP214全长正向插入植物双元表达载体pCAMBIA1300s的CaMV 35S启动子下游，获得针对锌指蛋白基因ZFP214的过量表达载体pCAMBIA1300s-ZFP214。