[发明专利]龙须菜多糖的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种大型海藻来源的作为细胞凋亡诱导剂 的龙须菜多糖及其在抗肿瘤中的应用，具体涉及一种以红藻龙须菜中提取并纯化的 多糖，其具有促使细胞凋亡诱导相关基因FADD和GADD的表达上调，并最终诱 导肿瘤细胞凋亡的作用。

背景技术

从研制创新药物角度出发，海洋药物的研究是开发以传统中药为来源的新型天 然活性药物的热点及重要方向之一。大型海藻龙须菜(Gracilariopsislemaneiformis) 为红藻门、真红藻纲、杉藻目、江蓠科、江蓠属，主要分布于我国山东、辽宁、江 苏、福建、海南等沿海地区。龙须菜性味甘，主要入肝经，具有助消化、解积腻、 清肠胃和止血降压、软坚化痰、清热利水、温经止痛的功效。龙须菜富含活性多糖、 藻红蛋白及膳食纤维和营养元素等，具有免疫调节活性、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒 等多种生物学活性和药用保健功效。龙须菜多糖作为海洋药物资源，具有良好抗肿 瘤效果，同时没有明显的毒副作用，这种双重作用有利于肿瘤病人的综合治疗和康 复，适于联合用药，值得进一步研究和开发成药用多糖或保健品多糖，以提高龙须 菜的经济利用价值。

肿瘤细胞的无限增殖性是肿瘤的显著特征之一。中医理论认为癌症的产生可能 是由于机体阴阳失衡导致。细胞增殖与死亡类似于中医的阴阳消长，这种阴阳消长 平衡被打破是导致癌症发生的原因之一。细胞凋亡是正常细胞死亡的重要途径之 一，但是在很多肿瘤组织中，细胞凋亡往往会失去控制，肿瘤的发生发展与细胞凋 亡失控密切相关。细胞凋亡是很多抗癌药物的靶点。参与细胞凋亡调控的蛋白有很 多，Fas相关死亡结构域蛋白(Fasassociateddeathdomain，FADD)是死亡受体途 径中重要的一类转接蛋白，它可以将Fas/FasL结合后的凋亡信号传导到下游蛋白， 激活Caspase8并导致下游Caspase3和Caspase6级联反应，从而引起细胞凋亡。另 一方面，当细胞受到外界因素损伤时，生长阻滞和DNA损伤基因(growtharrestand DNAdamagegene，GADD)被诱导高表达，进而通过上调P21、P27、P57等DNA 损伤修复有关基因，活化P38和JNK通路有效促进细胞凋亡。这为治疗肿瘤新型 药物的研制开发提供了新思路，也丰富了中医药扶正抗癌的理论，为我国传统中医 药进一步用于肿瘤的治疗提供理论依据。

鉴于龙须菜是一种容易获得且生长快的海洋藻类资源，为了充分利用这种藻类 资源，本领域的技术人员致力于进一步开拓其生物活性物质的用途。

发明内容

为了进一步开拓龙须菜多糖的用途，本发明提供了龙须菜多糖在制备用于诱导 细胞中的FADD和GADD基因的表达的制剂中的应用。

进一步地，上述方法中的龙须菜多糖的制备方法为：利用三氯乙酸法从龙须菜 (Gracilariopsislemaneiformis)中提取，包括以下步骤：

1)用水溶解龙须菜干粉，并用NaOH调节溶液pH至9-11，离心获得第一上 清液和第一沉淀；

2)在步骤1)中离心得到的第一沉淀中加入水溶解，并用NaOH调节溶液pH 至9-11，并再次离心，获得第二上清液；

3)合并第一上清液和第二上清液，并加入三氯乙酸进行沉淀，离心获得第三 上清液；

4)在第三上清液中加入无水乙醇进行沉淀，离心获得第二沉淀；

5)用丙酮洗涤第二沉淀，并冷冻干燥，获得粗提龙须菜多糖；

6)将步骤5)中的粗提龙须菜多糖溶于水，通过离子交换柱进行分步洗脱， 真空干燥后获得纯化的龙须菜多糖。优选地，离子交换柱为DEAESephadexA-25 离子交换柱；用蒸馏水、0.3mol/LNaCl和1.2mol/LNaCl溶液进行分步洗脱；分 步洗脱后获得3种级分，将最显著的级分作为纯化的龙须菜多糖进行后续实验。

优选地，步骤1)和步骤2)中，用NaOH调节溶液pH至10。

进一步地，步骤3)中加入的三氯乙酸的质量浓度为2％-5％。优选三氯乙酸的 质量浓度为3％。

进一步地，上述应用中的龙须菜多糖的单糖成分为D-半乳糖和3,6-内醚半乳 糖。

优选地，上述D-半乳糖含量为25％-30％，所述3,6-内醚半乳糖含量为 27％-34％。