[发明专利]一种高纯度灰树花多酚组分的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高纯度灰树花多酚组分的制备方法，属于功能食品的功能因子和药物领域。

背景技术

灰树花（Grifola frondosa）属担子菌亚门层菌纲非褶菌目多孔菌科树花菌属真菌，主要生长在亚热带至温带，在我国主要分布于福建、河北、吉林、广西和四川等地。作为一种珍贵的食、药兼用蕈菌，灰树花的多种营养素和生理功效成分居各种食用菌之首，素有“食用菌王子”和“华北人参”之美誉。相关研究表明，灰树花具有增强免疫力、抑制肿瘤、抗病毒、抗氧化防衰老、稳定血压、降血糖血脂、改善脂肪代谢及缓解肝炎症状、增强记忆力等多种医疗保健功效。大量研究工作表明，多酚类物质具有抗氧化、抑菌、抗诱变、抗病毒、抗肿瘤、降血糖降血脂等多种功能活性。国内外对于灰树花多酚的研究报道较少。陈向东等人采用弱极性的大孔吸附树脂从灰树花菌丝体粗提物中分离制备多酚类组分，获得的组分是褐色粉末状产物，经验证具有抗氧化、抗菌及α-淀粉酶抑制等活性，但其制得的灰树花多酚是混合物，对灰树花多酚类物质的组分未做进一步纯化和鉴定，灰树花多酚组分有待进一步分离提纯（陈向东，刘晓雯，吴梧桐. 灰树花多酚的提取和活性研究. 食品与生物技术学报, 2005, 24 (4): 26-30.）。

本发明提出以灰树花子实体为原料，通过超声波辅助浸提技术制备灰树花多酚组分，利然后用超滤膜截留技术去除其中的多糖和蛋白等生物大分子，最后采用大孔吸附树脂NKA-Ⅱ柱层析-制备型高效液相色谱的串联分离纯化技术，制备多种高纯度的灰树花多酚类化合物单体。相比以往从灰树花菌丝体中提取多酚类物质，该发明采用以灰树花子实体为原料，原料来源更容易获得且多酚含量相比菌丝体来得高，多酚的提取得率也更高；与现有的研究报道相比，采用超滤膜过滤所制得的灰树花多酚组分去除了灰树花提取物中的多糖、蛋白等大分子物质，经柱层析-制备型液相色谱串联纯化技术纯化粗多酚组分，所制得的多酚组分纯度更高（纯度均大于95%），纯化后的多酚体外抗氧化活性也显著性提高，其中还原力均比等质量浓度（1 mg/mL）的抗坏血酸强。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速高效、纯度高、制备量较大的灰树花多酚类化合物单体的制备工艺。

一种高纯度灰树花多酚组分的制备方法，其制备步骤如下：

（1）预处理：将灰树花子实体干制品粉碎成粉末，过40～80目筛备用；

（2）浸提：取一定量的灰树花粉末，利用超声波辅助提取技术浸提2-4次，合并提取液，经板框过滤去除残渣；

（3）膜过滤：通过膜过滤装置进行过滤，截留蛋白及多糖，获得的滤液经浓缩、干燥后获得灰树花多酚粗提物；

（4）分离纯化：将灰树花多酚粗提物复溶于去离子水中，采用柱层析-制备型高效液相色谱串联分离纯化技术进行分离纯化。

本发明所述的超声辅助浸提的条件为：以水为提取溶剂，料液重量比为1：10-1：50，超声温度30-70℃，超声时间30-90 min，超声功率100-400w。

本发明所述的过滤膜为截留分子量为5 kD的超滤膜，滤液所采用的干燥方法为真空冷冻干燥或离心喷雾干燥。

本发明所述的柱层析的填料为NKA-Ⅱ型大孔吸附树脂，上样速度3 BV/h，吸附时间2 h，洗脱溶剂为20%-60%乙醇溶液，洗脱速度3 BV/h；经吸附、洗脱收集洗脱液，减压浓缩至干得粗品，以50%甲醇复溶后经0.45 μm滤膜过滤。

本发明所述的液相色谱条件为：制备型反相C18色谱柱，色谱柱规格：内径20 mm、长度250 mm、C18硅胶填料粒径5 μm，检测波长280nm，进样量1 mL，流速5-10 mL/min，柱温30℃，采用 A: 甲醇-B: 0.1%甲酸进行线性梯度洗脱，洗脱程序为

（1）0～30 min：A: 5%+B: 95%→A: 60%+B: 40%；

（2）30～35 min：A: 60%+B: 40%→A: 5%+B: 95%；

（3）35～45 min：A: 5%+B: 95%。