[发明专利]杏鲍菇原始母种的超低温保藏方法

说明书

本发明公开一种杏鲍菇原始母种的超低温保藏方法，A、制作PDA斜面试管，试管壁上的水珠和水分蒸发消失；B、把原始母种转接到PDA培养基，在恒温箱里22±1℃，黑暗培养16‑18天，使菌丝基本长满培养基；C、按甘油：吐温‑80：纯净水＝15％‑30％：0‑5％：80‑65％的容积比配制甘油剂，分装到耐高、低温的塑料试管中至其1/2‑4/5的总容量,进行高压灭菌后冷却；D、将带菌丝的数个培养基块，转移到试管里，甘油剂没过菌种块，密封；E、将塑料试管在‑18±2℃下先预冷1‑2天，再转移到‑80±5℃的冰箱里长期保藏。本发明能长达8年对杏鲍菇原始母种超低温保藏，并能保证其菌种活力和遗传的稳定性，不易变异，成本低。

技术领域

本发明涉及杏鲍菇原始母种的保藏方法领域，特别涉及一种杏鲍菇原始母种的超低温保藏方法。

背景技术

为了保持食用菌菌种的优良性状不变，需要对其母种进行保藏。当前食用菌菌种保藏主要用液氮低温保藏方法、斜面定期移植法等，液氮低温保藏方法、的保藏成本很高，斜面定期移植法等保藏时间短，菌种稳定性不好，易发生变异或退化等，现有技术中的一种草菇菌种的低温保藏方法(20061003531.7)在草菇菌种接种的试管斜面中加入质量分数为10-40％海藻糖溶液，可以使试管斜面在1-4℃保藏8个月，时间短。大球盖菇菌种保藏方法(200810017694.4)采用菌丝体真空冷冻干燥法提高菌种的低温耐冻性，再用冷冻管进行保藏，操作复杂。

发明内容

本发明的目的是提供一种适合工厂化运用的杏鲍菇原始母种的超低温保藏方法，能长期保藏，并能保证原始母种的活性。

本发明提出一种杏鲍菇原始母种的超低温保藏方法，包括以下步骤：

A、制作PDA斜面试管，经过无菌检测，把试管壁上的水珠和水分蒸发消失；

B、把原始母种转接到上述经检测合格的PDA培养基上面，在恒温箱里22±1℃，黑暗培养16-18天，使菌丝基本长满培养基；

C、按甘油：吐温-80：纯净水＝15％-30％：0-5％：80-65％的容积比配制甘油剂，再将其分装到耐高、低温的塑料试管中；每个塑料试管装甘油剂至其1/2-4/5的总容量,进行高压灭菌后冷却，无菌保藏备用；

D、在超净工作台内，无菌的条件下把PDA斜面试管内的培养基分切成培养基块，再将带菌丝的数个培养基块，转移到无菌的塑料试管里面，以甘油剂没过菌种块为标准，盖上盖子，用封口膜进行密封；

E、将塑料试管在-18±2℃下先预冷1-2天后，再转移到-80±5℃的冰箱里长期保藏。

优选地，所述E步骤中，塑料试管应直立分散放置，防止试管倒掉或挤压。

所述E步骤中，长期保藏的年限为8年以内。

所述A步骤中，PDA斜面试管内的PDA培养基含食用级盐0.8％-1.4％。

本发明的有益效果是：PDA培养基中添加质量含量为0.8％-1.4％食盐，在菌丝生长阶段，由于食盐中含有钠、镁、钙等金属离子，可以培养健壮的菌丝；在超低温保藏期间，可以使菌丝更快的吸收甘油小分子，更好的起到保护作用；在菌丝恢复阶段由于菌种块的水势差，菌种块容易吸水菌丝萌发成活率高。将把原始母种放到恒温箱黑暗培养16-18天，这是培养菌丝健壮营养体的关键，在此基础上才利于超低温冷藏，因为菌丝在光照下生长，其非常慢，容易向生殖方向转变，不利于培养健壮的营养菌丝体；预冷的作用就是进行分阶段降温，减少因急剧降温对杏鲍菇菌丝细胞的破坏作用，最大限度的保证杏鲍菇菌丝营养体的完整性。