[发明专利]基于磁分离的夹层结构RNA型流感病毒拉曼探针及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种流感病毒拉曼探针，其特征在于，该探针是基于磁分离的夹层结构RNA型流感病毒拉曼探针，由作为RNA型流感病毒免疫金磁捕获纳米粒子和免疫金信号纳米粒子组成，所述的免疫金磁捕获纳米粒子与RNA型流感病毒发生特异性免疫反应，通过与免疫金信号纳米粒子孵化，构筑成三明治夹心结构。

2.按权利要求1所述的流感病毒拉曼探针，其特征在于，所述的免疫金磁捕获纳米粒子具有磁性并修饰能捕获RNA型流感病毒抗体；所述的免疫金信号纳米粒子具备拉曼信号表达和抗体修饰。

3.按权利要求1所述的流感病毒拉曼探针，其特征在于，所述的免疫金磁捕获纳米粒子通过下述方法制备：通过三氯化铁、二氯化铁在碱性条件下利用共沉淀法制备，同时以植酸钠为桥连剂结合柠檬酸三钠还原制得金纳米粒子，形成金磁纳米粒子；向金磁纳米粒子中加入流感病毒多价抗体，以金-氮键结合抗体，包括；室温孵化；加入牛血清白蛋白封闭活性位点，室温再孵化；磁分离，洗涤，重新分散在磷酸缓冲溶液中，制得所述的免疫金磁捕获纳米粒子。

4.按权利要求3所述的流感病毒拉曼探针，其特征在于，所述的免疫金磁捕获纳米粒子的合成中，1－3mL金磁纳米粒子中加入5－15μL Influenza A Ig G 150u/mL，孵化时间为30分钟。

5.按权利要求1所述的流感病毒拉曼探针，其特征在于，所述的免疫金信号纳米粒子通过下述方法制备：

采用Frens法，将金纳米粒子与4-巯基苯甲酸(4-MBA)溶液混合，室温孵化，离心，弃去上层溶液，重新分散在PBS溶液中，加入N-羟基琥珀酰亚 胺溶液和1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐溶液溶液，再加入Influenza A Ig G，室温孵化，加入BSA溶液封闭活性位点，室温孵化，10000rpm离心，用PBS溶液洗涤，最后弃去上层溶液，重新分散在PBS溶液中，获得免疫金信号纳米粒子。

6.按权利要求5所述的流感病毒拉曼探针，其特征在于，所述的免疫金信号纳米粒子制备中，将1－5mL金纳米粒子与2.5－7.5μL 1mM 4-MBA溶液混合，室温孵化30－50分钟。

7.按权利要求1所述的流感病毒拉曼探针，其特征在于，该探针利用磁分离能分离基质干扰，借助可携带式拉曼光谱仪实现临床诊断现场的快速RNA型流感病毒检出。

8.一种快速检出H1N1和H3N2的方法，其特征在于，其包括步骤，将制得的免疫金磁捕获纳米粒子和免疫金信号纳米粒子与灭活后的H3N2混合后，室温孵化，磁分离后PBS水洗，再磁分离后，直接进行拉曼检测，在5分钟内实现H1N1和H3N2的快速检出拉曼光谱结果。

9.按权利要求8所述的方法，其特征在于，检测时，免疫金磁捕获纳米粒子、样品和免疫金信号纳米粒子室温孵化时间为1.5小时－2小时。