[发明专利]一种用作猪肺炎支原体疫苗的重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种用作猪肺炎支原体疫苗的重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：1。本发明还提供了上述重组蛋白的制备方法和应用。本发明的重组蛋白可用于制备猪支原体肺炎的预防性药物，本发明的重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性，免疫保护效果达到87.5％，可以作为一种良好的疫苗预防猪支原体肺炎；同时本发明的重组蛋白可低成本的大规模生产具有良好的市场前景。

技术领域

本发明属于生物技术制药领域，具体涉及一种可用作猪肺炎支原体疫苗的重组蛋白，本发明进一步涉及该重组蛋白的制备方法及其应用。

背景技术

猪支原体肺炎（Mycoplasmal pneumonia of swine，MPS）又称猪喘气病或猪气喘病，是由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）引起的一种慢性、接触性传染病，通过呼吸道在猪只和猪群之间传播，是猪场最常见的疫病之一。该病通常不引起猪的死亡，但会使其出现发热、咳嗽、呼吸困难等症状，造成食欲减退、生长阻滞、饲料转化率降低、上市时间延迟。本病一旦传入猪群，很难彻底清除，且该病通常与其他病毒或细菌引起猪呼吸系统疾病综合征（Porcine respiration disease complex, PRDC）。根据流行病学资料，该病广泛分布于包括发达国家在内的世界各地。在我国有超过95%的猪场均为Mhp血清阳性[He Y, Xu MJ, Zhou DH, et a1. Seroprevalence of Mycoplasma hyopneumoniae inpigs in subtropical southern China [J]. Trop Anim Health Prod, 2011, 43 (3):695-698. ]。因此，Mhp是一种在我国广泛存在，长期危害养猪业并造成巨大损失的病原菌之一。

该病用抗菌药物防控必须长期给药，不仅增加了饲养成本也易使感染菌株产生耐药性。目前上市的Mhp疫苗包括灭活苗和弱毒苗。灭活苗能够降低肺部病理损伤，提高日增重，激发机体的体液免疫，但几乎不产生细胞免疫，也不能阻止Mhp感染[Sibila M, BernalR, Torrents D, et al. Effect of sow vaccination against Mycoplasma hyopneumoniae on sow and piglet colonization and seroconversion, and pig lunglesions at slaughter [J]. Vet Microbiol, 2008,127(1-2): 165-170.]和在猪群间的传播[Meyns T, Dewulf J, de Kruif A, et al. Comparison of transmission ofMycoplasma hyopneumoniae in vaccinated and non-vaccinated populations [J].Vaccine, 2006, 24(49-50): 7081-7186./Villarreal I, Meyns T, Dewulf J, et al.The effect of vaccination on the transmission of Mycoplasma hyopneumoniae inpigs under field conditions [J]. Vet J, 2011, 188(1): 48-52.]。我国江苏省农科院研发了猪支原体肺炎弱毒活疫苗(168株)。该疫苗能有效激发机体的细胞免疫和局部粘膜免疫[周勇岐, 赵永前. 猪支原体肺炎(168株)活疫苗的作用机理与应用[J]. 中国牧业通讯, 2008, 10: 49-52]。但需要采用肺内注射的方式，操作难度大，因此这种疫苗推广难度大。Mhp苛刻的培养条件和培养时容易被其他细菌和支原体污染也使得上述两种疫苗成本较高。因此，研发新型、有效、低成本的基因工程亚单位Mhp疫苗就成为防治猪支原体肺炎的重要手段。