[发明专利]一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法

权利要求书

1.一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法，其特征在于步骤如下：

A)取三个塑料盒，分别在塑料盒盖子的中央打一个孔；在盖底填充两层吸水垫；在吸水垫上面放置一片硝酸纤维素膜；然后在其中两个塑料盒的硝酸纤维素膜上点加1-2mL浓度为0.5-3mg/L的羊毛角蛋白溶液，室温下晾干，将上述两个塑料盒标记为I和II，其中I为阳性对照，II为阴性对照；取文物样并将其在90-110倍质量的磷酸盐缓冲溶液中溶解1.5-2.5h，取80-100μL的上清液，将其点加在剩余的塑料盒的硝酸纤维素膜上，室温下晾干，标记为III；

B)向I，II，III的孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL浓度为0.5-1.5wt%的牛血清蛋白溶液；

C)向I，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL稀释后的兔抗羊毛角蛋白抗体溶液；向II孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL磷酸盐缓冲溶液；

D)向I，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL磷酸盐缓冲溶液进行洗涤，共滴加三次；

E)向I，II，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL的已稀释100-400倍的荧光标记山羊抗兔抗体溶液；

F)向I，II，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL磷酸盐缓冲溶液进行洗涤；共滴加三次；

G)将I，II，III放置于波长为365nm的紫外灯下观察结果，I的硝酸纤维素膜上有荧光斑点出现，II的硝酸纤维素膜上没有荧光斑点出现；若III的硝酸纤维素膜上有荧光斑点出现，则说明检测的文物样是羊毛织品。

2.如权利要求1所述的一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法，其特征在于，所述塑料盒的规格为4×3×0.6cm，所述孔的直径为0.3-0.8cm。

3.如权利要求1所述的一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液的pH为7.4。

4.如权利要求1所述的一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法，其特征在于，所述稀释后的兔抗羊毛角蛋白抗体溶液的浓度为0.01-0.02mg/mL。

5.如权利要求1或4所述的一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法，其特征在于，所述荧光标记山羊抗兔抗体溶液的制备方法如下：向每2.5-3.5mLpH为5.5的PBS缓冲液中依次加入0.14-0.16mg的荧光微球、2.6-2.8μL的现配的浓度为4-6mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液和8-12μL的浓度为1mg/mL的山羊抗兔抗体溶液，得到混合液，将所述混合液在室温下搅拌1.5-2.5h，用1wt%的牛血清蛋白溶液封闭25-35min后在8000-10000r/min、4℃条件下离心处理8-12min，移除上清液，将沉淀加入到体积为山羊抗兔抗体溶液1倍pH为5.5的PBS缓冲液中复溶、混匀，制得荧光标记山羊抗兔抗体溶液。

6.如权利要求5所述的一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法，其特征在于，所述荧光微球为聚苯乙烯荧光微球，粒径为100-110nm，激发波长为365nm，发射波长为610nm。

7.如权利要求5所述的一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法，其特征在于，所述牛血清蛋白溶液的用量为混合液体积的1-1.2倍。