[发明专利]固相多分析物测试

说明书

本发明专利申请是国际申请号为PCT/US2009/042061，国际申请日为 2009年4月29日，进入中国国家阶段的申请号为200980126100.6，名称为 “固相多分析物测试”的发明专利申请的分案申请。

交互引用

根据35USC§119(e)的规定，本申请要求2008年4月29日提交的美国 专利申请序列号61/048,892的优先权，其整体内容在此引用作为参考。

技术领域

本申请涉及测定样品(如身体样品或非身体样品)中一种或多种分析物 (例如滥用药物、有毒化学品、处方药等)的存在和/或量的方法和组合物， 并且更特定地为采用竞争性免疫测试来实现这一目标的方法和组合物。在一 些实施方式中，方法和组合物可用于同时、并行或连续测定样品中两种或多 种分析物的存在或量。本申请描述了包含结合在一个固相上的两种或多种不 同分析物的固相分析物组合物，以及在竞争性免疫测试中使用来测定一种或 多种目标分析物的存在和量的方法。

发明背景

例如放射免疫测试(RIA)和酶免疫测试(EIA)等免疫测试是用于测定 样品中一种或多种目标分析物的存在、特性和量的有效方法。许多免疫测试 将特异于目标分析物的抗体固定化在固相上，例如微孔板或珠子；检测所结 合的抗体与样品中存在的分析物之间的结合，例如通过使用三明治测试。其 他免疫测试将分析物固定化；这些免疫测试称为固相抗原或固相分析物免疫 测试。在固相分析物免疫测试中，固相分析物与样品中存在的分析物竞争结 合于特异于分析物的抗体。通常，在这样的固相分析物测试中，抗体是可以 用一些方式检测的，例如它是被标记的，例如放射性、荧光、发光或酶(例 如可以在存在合适底物时发生酶反应，产生颜色变化)标记的，或是它的存 在可以通过本身被标记的第二抗体来检测。

为了测定特定的样品是否包含一种以上的目标分析物，以前的方法通常 采用单独的固相组分(例如单独的微孔板或是几套微珠)，每种固相组分包 含特异于一种特定分析物的结合抗体，或是每种固相组分包含单一类型的结 合分析物。这样针对每种分析物需要单独的固相组分，使得多分析物测试昂 贵、技术复杂并且花时间。需要能有一种有效且相对便宜的分析物检测方 法，能够快速测定样品中一种或多种分析物的存在和/或量，包括例如滥用药 物等分析物。

发明简述

免疫测试是检测样品中分析物的存在和/或量的有力工具。然而，能够检 测样品中的多种分析物，通常需要使用多个单独的测试，例如每种目标分析 物一个测试，这就提高了成本、时间和过程的技术复杂性，并且导致操作者 可能在多个步骤中的一个步骤产生误差。发明者惊奇地发现使用包含结合在 一个固相上的至少两种分析物的固相分析物组合物，能够提高多分析物测试 的性能，表现出高灵敏度和高效率。本发明所述的多分析物测试很灵活，可 以同时、连续或并行进行，从而降低成本、时间和过程的复杂性。

因此，本发明提供了一种测定样品中目标分析物的存在的方法，包括：

(a)使固相分析物组合物接触i)抗体，其中所述抗体特异于所述目标分析 物；和ii)样品；其中所述固相分析物组合物包含结合在固相支持物上的至少 两种不同的分析物，其中所述至少两种不同的分析物中的一种为目标分析 物，以及

(b)测定样品中是否存在目标分析物。

在一些实施方式中，固相分析物组合物首先与样品相接触，然后与抗体 相接触。在一些实施方式中，抗体可检测标记，例如，标有荧光、发光(包 括化学发光或生物发光)、放射性或酶标记物等可检测标记物。在一些实施 方式中，抗体没有被标记。

在一些实施方式中，方法包括去除没有结合于固相分析物组合物的抗 体。

在一些实施方式中，方法包括如果存在分析物，测定分析物存在的量。

在一些实施方式中，通过比较样品中结合于固相分析物组合物的抗体产 生的信号和不包含目标分析物的对照样品中结合于固相分析物组合物的抗体 产生的信号来测定样品中存在分析物。

在一些实施方式中，结合于固相分析物组合物的抗体产生的信号是由抗 体上的可检测标记物产生的。

在一些实施方式中，结合于固相分析物组合物的抗体产生的信号是由第 二抗体与所述抗体结合产生的，其中所述第二抗体被可检测标记。