[发明专利]脑卒中的miRNA分子标志物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的涉及脑卒中的miRNA分子标志物及其应用，更具体的涉及mir-4330和/或miR-4330在诊治脑卒中的新用途。

背景技术

脑卒中是一个症候群，包括缺血性脑卒中、出血性脑卒中。众所周知，脑卒中一旦发生，死亡率极高，而且存活后的残废率高达70％，且复发率极高。根据卫生部公布的统计资料，目前中国约有600万脑卒中残存者，每年新发病例150万，而且发病逐渐年轻化。连续几年来，心脑血管疾病的死亡构成居各类疾病的第一位，占死亡构成的40％以上。而其中单独脑卒中一项的发病率和死亡率一直居第二位，占各类疾病死亡的20％以上。脑卒中传统的危险因素包括年龄、高血压、吸烟、饮酒、糖尿病、高血脂及冠心病史等，但这些传统危险因素只能解释约50％的脑卒中发病，提示存在其它危险因素，如遗传危险因素。寻找脑卒中的致病基因，从分子水平揭示脑卒中的发病机理，可为及早发现脑卒中的危险人群、预防脑卒中的发生提供帮助。

miRNAs是内源性非编码的约20-25个核苷酸单链RNA分子。通过结合到相应mRNA3‘非翻译区，诱导mRNA降解或抑制其翻译。miRNAs被报道在多种病理和生理过程发挥关键作用，包括细胞增殖，凋亡，细胞分化，心血管疾病，神经障碍和癌症等。

本发明通过生物信息学方法对已发表的脑卒中的miRNA高通量转录组数据进行整合分析，选取后备miRNA进行分子生物学验证，RT-PCR结果显示，本发明提供的miR-4330和脑卒中密切相关，可用于临床诊断及预防检测，具有很好的实际应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供mir-4330和/或其成熟miRNA在制备预防、诊断和/或治疗脑卒中试剂中的应用。mir-4330的序列见序列表SEQ ID NO 1。mir-4330的成熟miRNA为miR-4330其序列见序列表SEQ ID NO 2。

进一步，预防、诊断脑卒中试剂包括基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测脑卒中样本中mir-4330和/或miR-4330的转录或基于免疫检测方法检测脑卒中样本中miR-4330调控的靶基因的表达情况，优选采用northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、检测脑卒中样本中mir-4330和/或miR-4330的转录；采用ELISA和/或胶体金试纸条检测脑卒中样本中miR-4330调控的靶基因的表达情况。

优选的，基于定量PCR方法包括特异性扩增mir-4330和/或miR-4330的引物；所述的基于探针杂交方法包括与mir-4330和/或miR-4330的核酸序列杂交的探针；所述免疫检测方法包括与miR-4330调控基因表达蛋白特异性结合的抗体。

进一步，检测外周血中mir-4330和/或miR-4330的转录或miR-4330调控的靶基因的表达情况。

进一步，所述的治疗脑卒中试剂包括抑制剂和/或抑制剂组合物下调mir-4330和/或miR-4330的转录和/或阻断miR-4330的活性。

优选的，采用反义寡核苷酸、antagomiRs、miRNA海绵、miRNA Erasers、Target Masking和/或多靶点反义寡核苷酸的方法下调mir-4330和/或miR-4330的转录和/或阻断miR-4330的活性。

本发明的目的还在于提供一种抑制脑卒中试剂，所述抑制脑卒中试剂包含：

(a)抑制剂和/或抑制剂组合物，所述的抑制剂和/或抑制剂组合物下调mir-4330和/或miR-4330的转录和/或阻断miR-4330的活性；

(b)药剂学上能接受的载体。

优选的，采用反义寡核苷酸、antagomiRs、miRNA海绵、miRNA Erasers、Target Masking和/或多靶点反义寡核苷酸的方法下调mir-4330和/或miR-4330的转录和/或阻断miR-4330的活性。

本发明的目的还在于提供一种脑卒中诊断试剂，所述脑卒中诊断试剂能够检测脑卒中样本中mir-4330和/或miR-4330的转录或免疫检测方法检测脑卒中样本中miR-4330调控的靶基因的表达情况。