[发明专利]一种B型流感嗜血杆菌荚膜多糖的制备方法及联合疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及，具体涉及到一种B型流感嗜血杆菌荚膜多糖的制备方法及联 合疫苗。

背景技术

流感嗜血杆菌是常见的致病菌，仅对人类致病，分带荚膜菌株和不带荚 膜菌株。荚膜菌株据荚膜多糖的特异性抗原不同分6个血清型(a-f)，其中b 型抗原毒力最大，是小儿败血症、脑膜炎和肺炎的主要致病菌。Hib荚膜由 脂多糖和荚膜多糖组成，主要成分是核糖基磷酸醇磷酸盐 (polyriboylribitolphosphate，PRP)，它的结构包括一个核糖、一个核糖醇以 及一个磷酸碱。

Hib通过飞沫传播，主要感染5岁以下儿童。新生儿通过胎盘传递血清 杀菌抗体，从母体获得的。以蛋白质为载体的结合疫苗接种儿童，产生的抗 体比单独用荚膜多糖疫苗高得多、且能维持较长时间，这些疫苗的基础是通 过PRP多糖与有免疫原性的蛋白载体以共价键结合，使半抗原变成完全抗 原，从而使非胸腺依赖抗原(Ti-Ag)转变成胸腺依赖抗原(Td-Ag)，促进T细 胞对B细胞的作用。Ti-Ag仅能激发体液免疫，而Td-Ag不仅能激发体液免 疫，而且还能引起细胞免疫，同时产生免疫记忆，通过抗原的转变，不仅使 小年龄儿童产生加强免疫反应，而且对再次接种也能产生加强免疫反应，由 此提高了疫苗的保护性能。

为此人们将PRP或其衍生物结合于一种蛋白载体(如白喉类毒素蛋白、 以减毒的白喉类毒素蛋白CPM197、破伤风类毒素、脑膜炎奈氏菌外膜蛋白 复合物等)上使其转变成T细胞依赖性多糖抗原来增强应答，结合疫苗具有 很好的免疫原性。

近年来，由于抗菌素的滥用，B型流感嗜血杆菌(Hoemophilusinflu enzatypeb，Hib)感染已成为导致世界各地幼儿发病和死亡的一个主要原因， 每年约有30-50万儿童死于Hib引起的脑膜炎和肺炎等疾病。

感染性疾病仍然严重威胁着世界人类的健康，尤其是导致婴幼儿发病、 住院和死亡的重要原因。随着科技的发展，新疫苗不断地被研究和开发， 目前各个国家纳人计划免疫的疫苗种类也日益增多，中国自2008年开始， 将免疫规划由原来的5苗防7病扩大为l4苗防l5病。疫苗种类增多所带来 的儿童接种次数增加和疫苗管理负荷增加等，使得研制联合疫苗势在必行。 目前国外的很多疫苗供应商和一些国内的疫苗企业都在致力于开发联合疫 苗，其中以DTaP为基础的联合疫苗又是当前开发的重点。

使用Hib疫苗是控制Hib侵袭性疾病的有效措施。Hib疫苗具有较好的 免疫原性,接种后可产生良好的免疫应答,可诱发机体产生有效的保护性杀菌 抗体。

预防白喉、破伤风和百日咳三种疾病的DTaP疫苗在中国婴幼儿免疫接 种中已广泛使用，预防婴幼儿脑膜炎和肺炎等疾病的Hib结合疫苗已经研制 成功并被纳入地方扩大免疫规划中，这两种疫苗免疫程序相同，目前国外已 有DTaP-Hib联合疫苗商品问世，但国内尚未研制成功DTaP-Hib联合疫苗。

目前研制的Hib结合疫苗是安全有效的，在接种3剂后，90％-99％的 儿童会产生抗体。因此，WHO建议将Hib疫苗纳入婴幼儿常规免疫规划。 另外，该疫苗与无细胞百白破疫苗(DTaP)具有相同的免疫程序，因此，研 制无细胞百白破B型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP/Hib)具有重大意义。 联合疫苗开发的目的是在减少疫苗注射次数的同时预防更多种类的疾病。其 意义不仅可以提高疫苗覆盖率和接种率、减少多次注射给婴儿和父母所带来 身体和心理的痛苦、减少疫苗管理上的困难、降低接种和管理费用；还可减 少疫苗生产中必含的防腐剂及佐剂等剂量，减低疫苗的不良反应等。

发明内容

本发明的目的是提供一种B型流感嗜血杆菌荚膜多糖的制备方法及联合疫 苗。

为达上述目的，本发明的一个实施例中提供了一种B型流感嗜血杆菌荚膜 多糖的制备方法，包括以下步骤：

(1)发酵培养：将B型流感嗜血杆菌接种到发酵罐中发酵，并于对数生长 的后期或静止期的前期终止培养，获得培养液；

(2)灭菌沉淀：将培养液灭菌后高速离心，收集上清液，并在上清液中加 入十六烷基三甲基溴化铵充分混匀，然后静置再离心，收集沉淀物；

(3)多糖提取和纯化