[发明专利]用于NT-proBNP检测的新型免疫传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种用于NT-proBNP检测的新型免疫传感器，包括纳米复合材料、电极、抗原、抗体（一抗）、酶标抗体（二抗）、蛋白质、底物溶液，纳米复合材料采用AuNPs/PDDA/RGO纳米复合物，电极采用玻碳电极，抗原采用NT-proBNP，蛋白质采用牛血清白蛋白，酶标抗体（二抗）采用辣根过氧化物酶标记，底物溶液采用TMB底物溶液，其特征是：利用纳米材料作为基底，通过纳米复合材料中的键合作用，使抗体（一抗）在传感器界面的固定量增大，且稳定性增强，所识别的抗原标志物增加，则结合到传感器表面的抗体（二抗）增加，通过酶联放大效应，使响应电流信号增大，采用电化学检测方法增强传感器检测灵敏度。

2.权利要求1所述的纳米复合材料的制备方法，包括如下步骤：

（1）由石墨粉通过改良的Hummers法合成氧化石墨烯（GO）；

（2）将氧化石墨烯（GO）悬液与PDDA混合，采用超声法将混合物混匀，再加入N₂H₄形成混合物，将此混合物重新分散到超纯水中即可得到还原的氧化石墨烯与PDDA混合物（RGO/PDDA）；

（3）将步骤（2）制得的RGO/PDDA加入到AuNPs中，超声，再分散到超纯水中即可得到AuNPs/PDDA/RGO纳米复合物。

3.权利要求1所述的用于NT-proBNP检测的新型免疫传感器的制备方法，包括如下步骤：

（1）纳米复合材料的固定：将权利要求2制备的AuNPs/PDDA/RGO纳米复合物固定到电极表面，制备基底载体；

（2）抗体（一抗）的固定：将抗体（一抗）固定到基底载体表面，采用封闭液将电极表面的空白位点封闭，减少非特异性吸附；

（3）抗原标志物的识别：通过抗原抗体反应，使抗原标志物结合到电极表面，采用PBST冲洗基底表面，减少牛血清白蛋白和抗原的非特异性吸附。

4.根据权利要求3所述的用于NT-proBNP检测的新型免疫传感器的制备方法，其特征是：包括如下步骤：

（1）纳米复合材料的固定：将5μL的AuNPs/PDDA/RGO纳米复合物滴涂到电极表面，25℃条件下放置1h，采用PBST冲洗电极表面，氮气吹干，获得基底电极；

（2）抗体（一抗）的固定：将5μL抗体（一抗）滴涂到步骤（1）所制备的基底电极表面，4℃下放置12h，将基底电极浸入1wt%牛血清白蛋白溶液中，37℃下温育1h，氮气吹干；

（3）抗原标志物的识别：37℃下将5μL抗原滴涂到步骤（2）所制备的基底电极表面，采用PBST冲洗基底电极表面，氮气吹干。

5.根据权利要求3或4所述的用于NT-proBNP检测的新型免疫传感器的制备方法，其特征是：所述电极采用玻碳电极，所述玻碳电极按下述方法处理，玻碳电极分别用0.3μm、0.05μmAl₂O₃和双蒸水的混合物抛光至镜面，依次用乙醇、双蒸水超声清洗，将超声好的电极置于0.5MH₂SO₄中，在0~1.6V电位范围循环伏安扫描至稳定，用双蒸水清洗，N₂吹干后待用。

6.权利要求1所述的用于NT-proBNP检测的新型免疫传感器或按权利要求3或4所述的制备方法制得的用于NT-proBNP检测的新型免疫传感器的检测方法，包括以下步骤：

（1）将5μL酶标抗体（二抗）滴涂到权利要求3或4所制备的传感器表面，在37℃下孵育30min，采用含有0.05wt%Tween-20的PBS洗液搅拌清洗5min；

（2）将步骤（1）获得的传感器浸入到1ml含H₂O₂的TMB底物溶液中，以铂丝电极为对电极，Ag/AgCl为参比电极，记录电流-时间曲线，初始电位：0伏；采样间隔：0.1秒；采样时间：100秒。