[发明专利]制备纤溶酶组合物的方法及其应用

说明书

【技术领域】

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种制备纤溶酶组合物的方法及其应 用。

【背景技术】

全球每年直接死于血栓型心脑疾病的人数就高达1800万，间接死亡人数超 过3000万，接近世界总死亡人数的1/3,已经成为人类健康的头号杀手。我国人 口众多，人口老龄化速度加快，心脑血管疾病的发病率和死亡率不断上升，每年 因患心脑血管疾病死亡的人数高达700万人，心脑血管疾病患病人数已经超过3 亿。仅我国整个心脑血管疾病相关市场已经超过1万亿元。心脑血管疾病背后主 要致病原因是血栓的形成。而血栓性疾病常常伴随其他慢性疾病，其中最为严重 和常见的是高血压和高血糖疾病。

溶栓疗法是目前认为治疗血栓栓塞性疾病最为有效并且可靠的手段，纤溶酶 可以通过溶解血栓中的主体支撑结构纤维网状蛋白，达到瓦解血栓再通血管的目 的，并且该药物安全有效。无任何出血性毒副作用。因此，纤溶酶被认为是目前 最具应用前景的预防和治疗血栓性心脑血管疾病的药物。

然而，目前纤溶酶制备主要依靠传统的大豆固体发酵制备纳豆，纳豆中含有 纤溶酶成分纳豆激酶。通过传统方法以大豆为原料制备的纳豆由于其具有氨臭 味、色泽暗淡，很难在国内得到普及。并且通过大豆发酵的传统方法工艺复杂、 周期长。传统方法制得纳豆中纳豆激酶含量低、活性低，功能单一，很难兼顾治 疗血栓性疾病所伴有的其它慢性疾病，其中最为常见和严重的当属高血压和高血 糖。而高血压和高血糖慢性疾病常常和血栓相伴而生，相互联系，相互影响，只 治疗其中一种很难根除其它疾病，同时治疗才可起到更好的功效。

【发明内容】

本发明的目的在于克服目前传统技术方法中以大豆为原料制备纤溶酶所存在 的工艺复杂、周期长，纤溶酶活性低伴随氨臭味，且功效单一的系列缺陷，提供 一种制备纤溶酶组合物的方法及其应用。

为实现上述目的，本发明提供的制备纤溶酶组合物的方法，它包括如下步骤：

(1)中草药经过中草药粉碎机粉碎后，经过100～120目筛制备中草药粉； 所选中草药原料选用黄芪、黄连、金银花和/或枸杞，以及选用丹参、葛根、三 七和/或山楂；

(2)将步骤(1)中制得的中草药粉作为营养成分添加到枯草芽孢杆菌培养 基中；所述枯草芽孢杆菌培养基包括如下成分：选取的所述中草药原料成分各5 g/L、葡萄糖5g/L、Na₂HPO₄·12H₂O5g/L、NaH₂PO₄·2H₂O1.0g/L、MgSO₄0.5 g/L、CaCL₂0.3g/L,培养基pH7.0～7.5；

(3)步骤(2)中的中草药粉在枯草芽孢杆菌的液体深层发酵；所述枯草芽 孢杆菌的发酵条件为：发酵温度30～32℃，初始pH值7.2～7.5，最适接种量 5％；生长周期24～25h，最适放罐时间为26～28h；

(4)步骤(3)中的发酵液经过5000rpm离心10～12min，去除沉淀，保留 上清液；离心之后的发酵上清液经过冷冻干燥制得纤溶酶组合物。

作为优选方案，所述步骤(4)中的冷冻干燥方法为：将发酵上清液于～80℃ 冻结，然后放入真空冷冻干燥机中，于真空度为10Pa，冷阱温度～50℃条件下 干燥30～32h。

上述枯草芽孢杆菌为BacillussubtilisQK，由中国典型培养物保藏中心保 藏，保藏编号为CCTCCNO:M203078。通过枯草芽孢杆菌的液体发酵，可以将中 草药的保健治疗功效与纤溶酶的溶栓功效有机结合，既具有纤溶酶的溶解血栓功 效，也具有中草药成分的相应治疗功效。

本发明还提供一种上述得到的纤溶酶组合物在制备溶解血栓、降血糖和降血 压药物中的应用。本发明制得的纤溶酶组合物溶栓活性高达37828IU/g，并且具 有治疗高血压和高血糖的功效。

本发明通过特定功效的中草药粉液体发酵枯草芽孢杆菌制备纤溶酶组合物， 工艺简单、周期短，无氨臭味、并且中草药的降血糖和降血压功效与纤溶酶的溶 解血栓功效通过枯草芽孢杆菌发酵有机结合，可以实现溶解血栓的同时达到治疗 高血压和高血糖疾病的目的。此方法工艺简单、周期短、适合产业化生产，且纤 溶酶组合物同时治疗三种疾病，应用前景广阔。具体具有如下优点：