[发明专利]一种气相色谱质谱联用测定山核桃脂肪酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及农产品品质检测领域，尤其涉及一种气相色谱质谱联用测定山核桃脂肪酸含量的方法。

背景技术

山核桃是我国特有的坚果类农产品，由于其含有丰富的油脂等营养物质，受到越来越多消费者的喜爱。山核桃在储藏或加工过程中，果仁中丰富的油脂在外界因素的作用下发生酸败作用，脂肪中某些脂肪酸分子结构中的双键被空气中的氧气氧化，生成分子量较小的醛和酸等混合物，导致油脂中脂肪酸含量发生变化，营养价值大大降低。

由于山核桃含油率较高，一般的油脂提取方法无法完全将山核桃中的油脂提取出来，所测定的含油率准确度较低。为了解决这个问题，采用索氏提取仪对山核桃进行油脂提取，虽然提取过程消耗时间相对较长，但是操作简单，并且能够将山核桃样品中的油脂完全提取出来，所测定的含油率更加准确。

目前，气相色谱质谱联用技术是检测脂肪酸的最常用方法，由于脂肪酸受热易分解，所以在进入仪器之前需要对其进行甲酯化，甲酯化产物耐高温，不易分解。现在国标中规定的脂肪酸甲酯化方法主要有三氟化硼法、三甲基氢氧化硫法和酯交换法。前两种方法中所使用的主要试剂三氟化硼和三甲基氢氧化硫甲醇溶液有毒，而且操作比较繁琐；本发明中所使用的甲酯化方法是在国标中规定的酯交换法的基础上经过适当修改后得到的，该方法能够对山核桃样品进行快速甲酯化，而操作却简化许多。

目前针对山核桃脂肪酸的研究主要为利用各脂肪酸之间的百分比含量来表征样品品质，这些研究中所使用的分析方法是经过计算总离子流图中代表各个脂肪酸的峰的面积占总峰面积的百分比含量，来确定各个脂肪酸在样品中的相对含量。这种算法虽然简单，但是由于缺少标准品的检测结果作为对照，无法精确测定出山核桃中各脂肪酸的确切含量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种气相色谱质谱联用测定山核桃脂肪酸含量的方法，该方法操作简单、测量准确、重复性好。

为了实现上述目的，本发明采取以下技术方案实现：一种气相色谱质谱联用测定山核桃脂肪酸含量的方法，具体包括如下步骤：

(1)山核桃仁含油率的测定：将山核桃样品破壳、取仁，使用粉碎机将山核桃仁粉碎后获得用于提取油脂的山核桃粉；取质量为M₁的山核桃粉，采用索氏提取仪提取山核桃油脂，提取剂为乙醚，加热温度为110℃，浸提时间1.5-2小时，滤提时间1.5-2小时，获得质量为M₂的油脂，则山核桃仁的含油率P_油为：

(2)山核桃油样品快速甲酯化：取山核桃油样放置于具塞试管中，加入正己烷(色谱纯)使油样完全溶解，加入氢氧化钾-甲醇溶液，震荡，使油样静置至澄清，再加入硫酸氢钠，摇振，使得最后溶液的PH值小于等于7，从而获得脂肪酸甲酯化样液；

(3)对脂肪酸甲酯化样液进行检测：将脂肪酸甲酯化样液放入气质联用仪进行检测，得到总离子流图；检测时的参数设置如下：

GC条件：色谱柱型号为DB-WAX，样品进样量为1μL，进样口温度为250℃，载气为纯净氦气，载气流速为1ml/min，采用分流模式，分流比为50：1；升温程序：起始温度50℃，停留1分钟，然后以25℃/分钟的速率爬升至200℃，最后以3℃/分钟的升温速率爬升至230℃，停留5分钟，总运行时间为22分钟；

MS条件：溶剂延迟2分钟，GC-MS接口温度280℃，电子轰击电离源，离子源温度230℃，离子能量70eV，四极杆温度150℃，扫描模式为全扫描，质量范围30-500质量单位；

(4)制作脂肪酸标准曲线和拟合方程：配置不同浓度梯度的脂肪酸甲酯标准品溶液；将配置好的标准品溶液在步骤(3)中的检测环境和检测条件下进行气质联用检测，获得脂肪酸甲酯标准品的总离子流图；通过脂肪酸分子量和脂肪酸甲酯分子量的比值将脂肪酸甲酯含量转化为脂肪酸含量，转换公式如下所示：

其中，W_酸为脂肪酸含量，W_甲酯为脂肪酸甲酯含量，M_酸为脂肪酸的分子量，M_甲酯为脂肪酸甲酯的分子量；以脂肪酸甲酯标准品的总离子流图中的峰面积作为自变量，以脂肪酸含量作为因变量，制作脂肪酸标准曲线，并拟合该标准曲线得到脂肪酸标准拟合方程；