[发明专利]针对前列腺特异性膜抗原的纳米抗体

说明书

技术领域

本发明涉及单域重链抗体技术(又称纳米抗体技术)，以及基因工程 抗体技术，特别是针对前列腺特异性膜抗原的单域重链抗体或多肽。

技术背景

单域抗体是指由普通抗体可变区(VH或VL)组成的基因工程抗体。 单域重链抗体(又称为纳米抗体，VHH抗体，variabledomainofheavychain ofheavy-chainantibody)是指仅由重链抗体(heavy-chainantibody)可变区 (Variableregion)组成的基因工程抗体，其中，重链抗体(heavy-chain antibody)是一种存在于骆驼、鲨鱼等动物体内天然缺失轻链的抗体。单 域重链抗体是目前已知的最小的完整抗原结合片段，具有分子量小、渗透 性好等特点，目前已广泛用于基础研究、医学诊断和检测、抗体药物开发 等领域。

前列腺癌是一种严重威胁老年男性健康的恶性肿瘤，其早期诊断和治 疗对于其预后具有重要的意义。前列腺特异性膜抗原(prostatespecific membraneantigen，PSMA)是一种位于前列腺细胞膜上的II型跨膜糖蛋 白，由750个氨基酸组成，分为胞内区(氨基酸序列为1-18)、跨膜区(19-43) 和胞外区(44-750)，相对于传统用于临床检测的前列腺特异抗原(prostate specificantigen，PSA)，是一种更加敏感和特异的前列腺癌肿瘤标记物，尤 其是在激素难治性前列腺癌及前列腺癌转移灶中均为高表达，在区分前列 腺癌和其他类型恶性肿瘤的敏感度和特异性分别为65.9％和94.5％。另外， 在多种非前列腺来源的实体瘤，如肺癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、肾癌和 结直肠癌等，PSMA也高度特异地表达于肿瘤血管内皮细胞上。而且本身 具有神经羧基肽酶和叶酸水解酶的活性，加之707个氨基酸组成的胞外区 能够提供多个抗原表位等特点，使其成为了肿瘤免疫靶向治疗和分子影像 学中重要的研究靶点。

目前，人们发现了多种针对PSMA亦制备了多种能与其发生特异性结 合的物质，包括单克隆抗体7E11、J591，适体A9和A10，重组技术得到 的ScFv抗体D7、Fab抗体及人源化抗体的报道，特别是已经通过美国FDA 批准用于前列腺癌的诊断和晚期核素治疗的111In-喷地肽，就是基于针对 PSMA的单克隆抗体与放射性核素相连而成。但与单域重链抗体相比，这 些配体存在生产成本相对较高，制备过程复杂等缺点。

发明内容

本发明的目的是提供针对前列腺特异性膜抗原的单域重链抗体，可以 被用于制备检测前列腺特异性膜抗原的试剂和工具。

本发明提供一个针对前列腺特异性膜抗原的单域重链抗体(即本发明 针对前列腺特异性膜抗原的纳米抗体)，具有SEQIDNO.：1所示的氨基酸 序列，其氨基酸序列可通过标准化的抗体氨基酸序列编号方法 (ImMunoGeneTics，IMGT)进行编号和结构域的划分。

本发明提供一种蛋白质或多肽，其特征是包含框架区中的一个或者 两个以上的氨基酸序列，且至少与一个氨基酸序列具有90％同源性。

本发明提供一种蛋白质或多肽，其特征是包含互补决定区中的一个或 者两个以上的氨基酸序列，且至少与一个氨基酸序列具有80％同源性。

本发明提供一个核酸分子，其特征是编码SEQIDNO.：1，通过遗传密 码子可以随时获得该核酸分子的具体序列。该核酸分子的序列如SEQID NO.：2。

本发明还提供一个核酸分子，其特征是编码SEQIDNO.：1部分结构 域，通过遗传密码子可以随时获得该核酸分子的具体序列。

本发明所提供的核苷酸序列或者至少部分序列可以通过合适的表达 系统进行表达以得到相应的蛋白质或多肽。这些表达系统包括细菌，酵母 菌，丝状真菌，动物细胞，昆虫细胞，植物细胞，或无细胞表达系统。

本发明还提供一种载体，包含所述核酸序列。由于遗传密码子具有简 并性，该核酸序列可以根据不同的应用目的而不同。

本发明还提供一种宿主细胞，包括所述蛋白质或表达载体。