[发明专利]一种运用高效液相色谱检测马来酸阿法替尼异构体及主要降解杂质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，具体的说是涉及一种运用高效液相色谱检测马来酸阿法替尼异构体及主要降解杂质的方法。

背景技术

马来酸阿法替尼是一种不可逆转的ErbB家族阻断剂，可以选择且有效的阻滞ErbB家族受体(EGFR，HER2[ErbB2]和ErbB4)的信号传导和阻隔与癌细胞生长和分裂相关的主要通道。用于治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的一线治疗及HER2阳性的晚期乳腺癌患者(用于治疗因表皮生长因子受体(EGFR)突变的非小细胞肺癌(NSCLC)患者)。

马来酸阿法替尼化学名：4-二甲氨基-丁-2(E)-烯酸[4-(3-氯-4-氟苯胺基)-7-(四氢呋喃-3(S)-氧基)-喹唑啉-6-基]酰胺,二-2(Z)-丁烯二酸盐。CAS号为850140-73-7；分子式为C₂₄H₂₅ClFN₅O₃·2C₄H₄O₄；结构式如下：

马来酸阿法替尼结构中存在一个手性碳，具有一个对映异构体杂质，其有效成分为马来酸阿法替尼S光学构型，为了有效监控马来酸阿法替尼最终产品中R-光学构型的含量，需建立专属性强、准确度高、操作简便的马来酸阿法替尼异构体检测方法，以对产品质量进行严格控制。阿法替尼包含1个对映异构体杂质、1个顺式异构体杂质和1个主要降解杂质，结构式如下：

表1 阿法替尼异构体及主要降解杂质

CN104391058A中公开了一种阿法替尼及其异构体的检测方法，该方法条件下，所采用流动相为正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，并规定在混合溶剂中，正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为550-650：350-250：100：0.1。但是该操作方法较为复杂，并且阿法替尼顺式异构体、杂质I与阿法替尼对映异构体(表1)均不能达到有效分离，该方法专属性差，操作复杂，准确性差，对产品的质量控制是有一定风险的。因此建立一种稳定有效的分析检测方法对马来酸阿法替尼进行质量控制是非常有必要的。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于建立一种运用高效液相色谱检测马来酸阿法替尼异构体及主要降解杂质的方法，使得所述方法可以定量测定马来酸阿法替尼原料药及其制剂存在的异构体及主要降解杂质的含量(即表1中各杂质)，从而有效控制马来酸阿法替尼及含马来酸阿法替尼制剂产品的质量，专属性强。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种运用高效液相色谱检测马来酸阿法替尼异构体的方法，包括：

将待测马来酸阿法替尼原料药或其制剂用稀释液配制成检测溶液，以键合直链淀粉-三氯苯氨基甲酸酯为固定相，采用正己烷-乙醇-有机碱溶液为流动相并进行等度洗脱，在阿法替尼吸收波长下记录HPLC谱图。

针对现有检测方法无法完全分离马来酸阿法替尼异构体的缺陷，本发明采用三氯苯氨基甲酸酯为填料的色谱柱，以正己烷-乙醇-有机碱溶液为流动相，可以定量测定马来酸阿法替尼及其制剂存在的异构体的含量，能够完全分离阿法替尼和各异构体，峰型较好，符合中国药典的规定。

作为优选，所述以键合直链淀粉-三氯苯氨基甲酸酯(别名ATPC，直链淀粉-(3-氯苯氨基甲酸酯))为填料的色谱柱可采用 ID产品，规格4.6×250mm，5μm。

作为优选，所述有机碱溶液为乙二胺溶液、二乙胺溶液或三乙胺溶液。

进一步优选地，所述有机碱溶液中有机碱的体积百分比浓度为0.05-0.15％，更优选地，所述有机碱溶液中有机碱的体积百分比浓度为0.1％。

作为优选，所述流动相中正己烷、乙醇、有机碱溶液的体积比为79-81:19-21:0.05-0.15。在本发明的一些具体实施方式中，所述流动相可选择如下：

正己烷：乙醇：有机碱溶液＝79:21:0.15；

正己烷：乙醇：有机碱溶液＝80:20:0.1；

正己烷：乙醇：有机碱溶液＝81:19:0.05。

作为优选，所述梯度洗脱的流速为0.8mL/min，所述固定相的柱温为30℃，所述检测时的进样量为10μL，所述检测溶液中阿法替尼的浓度为0.5mg/mL，所述稀释液为无水乙醇。所述流速、柱温、进样量以及检测溶液中阿法替尼的含量等参数可根据实际检测中的情况进行调节，本发明所提供的优选值为参考值。