[发明专利]一种紫花杯冠藤组培快繁的方法

权利要求书

1.一种紫花杯冠藤组培快繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)外植体的选择及处理：选用带有腋芽的野外植株，用干净的剪刀剪下带有2个腋芽的茎段，把茎段用干净的封口袋保存，保存时间不超过两天并且不能沾水；

(2)外植体的消毒：把步骤(1)得到的茎段放在烧杯中，先加入2～4滴洗洁精，再加水冲洗2～3次至无泡沫，冲洗时间不能过长以免造成二次污染，然后将其在超净台中先用体积浓度70％的酒精浸0.5～2分钟，无菌水冲洗2～4次，用加两滴吐温的质量浓度为5％的次氯酸钠溶液消毒3～7分钟后用无菌水洗4～6次；再用加两滴吐温的质量浓度0.1％的升汞消毒5～15分钟，后用无菌水洗5～6次；

(3)接种培养：将茎段剪成1cm的小段，每段带两个腋芽，将其接种到接种培养基上，所述的接种培养基为MS+6-BA0.05mg/L+IBA0.1mg/L+糖30g/L；

(4)继代增殖培养：接种成功后将分化的芽接种到继代增殖培养基上进行继代增殖，每次继代30天，所述的继代增殖培养基为MS+6-BA1mg/L+IBA0.1mg/L+糖30g/L；

(5)生根培养：将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基上诱导生根，所述的生根培养基为1/2MS+IBA0.1～0.2mg/L+糖20g/L。

2.根据权利要求1所述的紫花杯冠藤组培快繁的方法，其特征在于，步骤(4)所述的继代增殖培养，如在继代过程中苗有细弱现象，则用所述的继代增殖培养基和MS+6-BA0.05mg/L+IBA0.1mg/L+糖30g/L培养基交替使用培养以达到壮苗目的，每30天更换一次。

3.根据权利要求1或2所述的紫花杯冠藤组培快繁的方法，其特征在于，步骤(3)、(4)和(5)的培养条件均为：23±1℃，光照时间12小时/天，光照强度2000Lx，pH值为6.2。

4.根据权利要求1所述的紫花杯冠藤组培快繁的方法，其特征在于，还包括组培苗移栽，具体如下：

组培苗根长出2～3cm时出瓶，出瓶前练苗一周，先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗2d，然后解开封口膜，炼苗5d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，用多菌灵1000倍液或百菌清1000倍液清洗并浸泡幼苗根部，防止病害的发生，移栽到经消毒的栽培基质中，温度控制在24-26℃，湿度控制在70％，15d以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50％。

5.根据权利要求4所述的紫花杯冠藤组培快繁的方法，其特征在于，所述的栽培基质用腐殖土、园土和沙按照1∶1∶1的体积比混合而成。

6.根据权利要求1所述的紫花杯冠藤组培快繁的方法，其特征在于，步骤(2)所述外植体的消毒方法为：把步骤(1)得到的茎段放在烧杯中，先加入3滴洗洁净，再加水冲洗3次至无泡沫，然后将其在超净台中先用体积浓度70％的酒精浸1分钟，无菌水冲洗2次，用加入两滴吐温的质量浓度为5％的次氯酸钠消毒5分钟后用无菌水洗5次；再用加入两滴吐温的质量浓度0.1％的升汞消毒10分钟，后用无菌水洗6次。