[发明专利]一种抗肿瘤相关抗原WT1特异性CTL及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生命科学技术领域，尤其涉及一种抗肿瘤相关抗原WT1特异性CTL及其制备方法。

背景技术

恶性肿瘤是威胁人类生命健康的第二大致死因素。据统计，2008年全球新发恶性肿瘤患者1270万例，死亡760万例。恶性肿瘤的发生和侵袭转移过程受多层次、多因素调控，癌基因与抑癌基因作用的失衡是其中的关键环节之一。因此，寻找新的或进一步揭示已有癌基因或抑癌基因的功能，对阐明恶性肿瘤发生和演进机理、研发潜在治疗靶点具有重要意义。Wilms瘤基因1(Wilms’tumorgene1，WT1)首先在肾母细胞瘤(又称Wilms瘤)中作为抑癌基因被克隆鉴定，位于人11号染色体短臂1区3带，长约50kb，有10个外显子，富含“GC”同源序列。WT1基因编码产物为长约52-54kD的蛋白质。正常生理情况下，WT1主要在胚胎发生过程中表达，参与心脏、肾脏和脾脏等器官的形成。WT1在正常成体组织中表达部位局限且表达强度极低。WT1在成体组织中的异常表达与多种恶性肿瘤的发生密切相关，但根据细胞特征不同，其可发挥癌基因或抑癌基因作用。一方面，在Wilms瘤等儿童恶性肿瘤中，WT1通过干扰细胞增殖信号等途径抑制细胞生长，发挥抑癌基因作用；另一方面，WT1可增强肿瘤细胞的抗凋亡能力，并通过调控原癌基因K-ras增强细胞的增殖能力，提示WT1亦可发挥癌基因作用。

WT1基因是一种肿瘤相关性抗原(tumorassociatedantigen,TAA)，在各型白血病有高水平表达，此外在多种实体瘤包括肺癌、乳腺癌、甲状腺癌、食道癌、肝细胞癌和胃肠间质瘤等实体瘤中都有过表达，并且表达水平与预后呈负相关。WT1表达水平增高可促进细胞生长、凋亡受抑和诱导WT1转基因小鼠产生白血病；反义寡核苷酸抑制WT1表达或SiRNA沉默WT1后能使白血病细胞及实体瘤细胞生长停止，表明WT1在白血病和实体瘤的发展中担当着癌基因角色。根据以上发现，表明WT1是免疫治疗的理想靶抗原。而且最近美国国家癌症研究所根据疗效、免疫原性等标准评估了包括WT1在内的75个肿瘤抗原，WT1排名第一，被评为免疫治疗的首选靶抗原。此外，研究发现白血病细胞高表达WT1，表明基于WT1的免疫治疗，有望靶向杀死肿瘤细胞，进一步证明了WT1作为肿瘤免疫治疗优越性。为今后肿瘤患者的治疗和预后预测提供理论依据。

在人类抗癌历史上，与癌症抗争有过三大利器：外科手术，化疗，与放射治疗。至此，免疫科学家斯坦曼利用先前发现的树突状细胞(Dendriticcell,DC)，激发自身的免疫力清除肿瘤，利用自己的研究成果，将生命由预期的数月延长到四年。由于他对免疫领域的贡献在2011年获得诺贝尔生理医学奖，在肿瘤领域并开创了一个新的天地——肿瘤免疫细胞治疗。他的研究成果现在已经广泛应用于临床，已经成为继手术、放、化疗后的第四种癌症治疗方式。由于肿瘤免疫细胞治疗能够联合手术、化疗、放疗精准清除残余肿瘤细胞，防止复发和转移，加强免疫监视作用，提升患者生存质量和时间，并且没有放化疗的毒副作用和手术的巨大伤害。近年来，在临床应用中受到越来越广泛的关注，是国内外研究的热点，已被公认为是最具前景的肿瘤治疗方法。

过继性免疫细胞治疗是指通过输入自身或同种异体的肿瘤杀伤细胞来治疗肿瘤的方法。它不仅可以纠正细胞免疫功能的低下，促进宿主抗肿瘤免疫的功能，还可以直接发挥抗肿瘤的作用。其中细胞毒性T细胞的过继治疗有着特殊的优越性。细胞毒性T细胞的过继治疗是实体肿瘤，尤其是肿瘤相关抗原比较明确的恶性黑色素瘤、结直肠癌、肝癌、前列腺癌、肺癌等的研究热点。特异性CTLs(细胞毒性T细胞)的产生是通过将肿瘤抗原负载成熟的DC(树突状细胞)刺激T细胞从而获得抗原的特异性CTLs克隆。这种CTL能识别并杀伤携带相应肿瘤抗原的恶性细胞，经过大量的扩增就能应用于临床治疗。这种治疗方法相比其他的治疗方法具有易获得、可操作性强，靶向性好，安全性高等特点。