[发明专利]幽门螺杆菌耐药和定量多重基因检测体系及其试剂盒和应用

说明书

本发明涉及一种幽门螺杆菌耐药和定量多重基因检测体系及其试剂盒和应用。幽门螺杆菌耐药和定量多重基因检测体系包括多对引物，分别针对幽门螺杆菌的菌种鉴定基因（16S rRNA）、耐药基因（23S rRNA的2143位点、rdxA的148位点、pbp1A的1777位点和gyrA的261位点的多态性），以及定量分析基因ureC和ß‑globin。本发明的幽门螺杆菌耐药和定量多重基因检测体系及其试剂盒不需要采用常规培养等步骤，可在同一反应体系直接对组织样本进行菌种鉴定、耐药和定量的同步检测和分析，弥补了常规检测方法通量低、耗时长和检出率低等缺点，第一时间为临床提供全面、精准、低成本的病原学诊断，指导幽门螺杆菌感染的精准诊断、个体化用药，以及疗效观察。

技术领域

本发明涉及一种多重基因检测产品以及该产品所用到的检测体系，属于生物技术领域。

背景技术

幽门螺杆菌（H.pylori）是一种革兰阴性、微需氧、弯曲状杆菌，主要寄居在人体胃部。幽门螺杆菌感染与慢性萎缩性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌等发生发展密切相关，因此引起临床的广泛关注。1994年，国际癌症研究机构IARC已将其列为人类I类致癌因子，是目前为止唯一被列为明确对人类致癌的细菌性病原微生物。很多报告认为幽门螺杆菌感染与冠心病、类风湿、肝胆病、肺结核、妊娠呕吐、直结肠癌及多种皮肤病等疾病有关。流行病学显示，全球几乎有一半的人口感染此菌，发展中国家甚至高达60%～70%。因此，幽门螺杆菌感染是世界各国需要面对的公共卫生问题。

幽门螺杆菌的疗效与其耐药性和感染量密切相关。幽门螺杆菌临床治疗的常规药物包括克拉霉素、甲硝唑、阿莫西林和左氧氟沙星。但是其耐药现象日益严重并呈全球性，极大地影响了临床疗效。

目前幽门螺杆菌的药敏和定量检测方法均有其局限性。例如：1）分离培养鉴定：幽门螺杆菌培养成菌落后，经生化反应鉴定。由于幽门螺杆菌培养需要微需氧条件，对营养条件要求苛刻，因此检出率很低，作为常规诊断手段不易推广, 且幽门螺杆菌培养需要一定的时间, 不利于快速诊断。2）组织病理切片染色法：该方法是把患者胃镜检查活检组织切片, 染色后可观察到组织中的幽门螺杆菌。该方法受幽门螺杆菌载量影响明显，且操作繁琐、费时，不适于大通量样本的检测。3）尿素酶依赖性试验（尿素呼气试验）：根据标志物不同分为¹³C呼吸试验及¹⁴C呼吸试验，临床应用广泛,。缺点是费用高、易受抑菌药物和抑酸药物的影响、敏感度低。4）免疫学检查：检测血清中或唾液和尿液中抗体（IgG）或直接检测粪便中幽门螺杆菌的抗原成分。其缺点是不能反映现症感染。5）定量分析：常用定量分析方法的是real-time PCR, 但该方法检测单一、通量小、对多个基因分析时成本高。6）药敏试验：该方法耗时长，操作繁琐，且依赖于分离培养菌株。

综上所述，如何快速、准确、全面地对幽门螺杆菌进行鉴定、耐药以及定量分析是本领域的技术人员迫切亟待解决的问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种可以快速、全面、准确、低成本的幽门螺杆菌耐药和定量多重基因检测体系及其试剂盒，以及采用该检测体系在制备诊断产品方面的应用。