[发明专利]一种检测人膀胱移行细胞癌细胞的核酸适配体及其在制备检测制剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种核酸适配体及其应用，特别是涉及一种可用于人膀胱移行细胞癌细胞及临床样本组织检测的核酸适配体及其制备检测试剂的应用方法。

背景技术

膀胱癌是我国泌尿外科临床上最常见的肿瘤之一，是一种直接威胁患者生存的疾病。在世界范围内，膀胱癌发病率居恶性肿瘤的第九位，在男性排名第六位，女性排在第十位之后。在欧美，膀胱癌发病率居男性恶性肿瘤的第四位，位列前列腺癌、肺癌和结肠癌之后，在女性恶性肿瘤亦排在十位以后。2002年世界膀胱癌年龄标准化发病率男性为10.1/10万，女性为2.5/10万，年龄标准化死亡率男性为4/10万，女性为1.1/10万。美国男性膀胱癌发病率为24.1/10万，女性为6.4/10万。美国癌症协会预测2010年美国膀胱癌新发病例数为70530例(男52760例，女17770例)，死亡病例数为14680例(男10410例，女4270例)。在我国，男性膀胱癌发病率位居全身肿瘤的第八位，女性排在第十二位以后，发病率远低于西方国家，2002年我国膀胱癌年龄标准化发病率男性为3.8/10万，女性为1.4/10万。近年来，我国部分城市肿瘤发病率报告显示膀胱癌发病率有增高趋势。膀胱癌男性发病率为女性的3-4倍。且城市居民膀胱癌死亡率明显高于农村。2009年我国城市居民膀胱癌年龄标准化死亡率男性为3.79/10万，女性为1.30/10万；而农村男性居民膀胱癌年龄标准化死亡率为2.42/10万，女性为0.81/10万。

膀胱癌患者会出现膀胱纤维化，膀胱容量减少，甚至出现输尿管尿液回流，并伴随肾水肿与肾脏发炎，出现尿血，甚至肾脏坏死和尿毒症，危及生命。另据有关报道表明，膀胱癌会引发结核病，有结核病史的患者经过积极抗菌治疗后，仍有尿路刺激症状或尿沉渣异常。此外，膀胱癌患者在胀尿时疼痛会加倍，必须等到排尿后疼痛才会稍缓。生活上的各种压力都会使膀胱癌患者的病情加重或复发，大大降低了患者的生活质量。

膀胱癌有多种类型，其中包括尿路上皮(移行)细胞癌、鳞状细胞癌和腺细胞癌，其次还有较少见的小细胞癌、混合型癌、癌肉瘤及转移性癌等。在这当中，膀胱尿路上皮癌最为常见，占膀胱癌的90％以上；膀胱鳞状细胞癌比较少见，约占膀胱癌的3％～7％。

现如今，尿细胞学检查是膀胱癌诊断和术后随诊的主要方法之一。尿标本的采集一般是通过自然排尿，也可以通过膀胱冲洗，这样能得到更多的癌细胞，利于提高诊断率。尿细胞学检测膀胱癌的敏感性为13％～75％，特异性为85％～100％。敏感性与癌细胞恶性分级密切相关，分级低的膀胱癌敏感性较低，一方面是由于肿瘤细胞分化较好，其特征与正常细胞相似，不易鉴别，另一方面由于癌细胞之间黏结相对紧密，没有足够多的癌细胞脱落到尿中而被检测到，所以尿细胞学阴性并不能排除低级别尿路上皮癌的存在。此外，尿标本中癌细胞数量少、细胞的不典型或退行性变、泌尿系感染、结石、膀胱灌注治疗和检查者的技术差异等因素会影响尿细胞学检查结果。虽然大部分尿液膀胱癌标记物显示出了较高的敏感性，但是其特异性却普遍低于尿细胞学检查，到目前为止，仍然没有一种理想的标记物能够取代膀胱镜和尿细胞学检查而对膀胱癌的诊断、治疗、术后随诊和预后等方面做出足够的判断。因此，寻找出一种理想的标记物进而能够开发出快速、准确诊断以及治疗膀胱癌的方法就显得尤为重要。

核酸适配体(nucleic acid aptamer)是从人工合成的随机单链核酸库中筛选出来的能高亲和性结合靶分子的20-50碱基的寡聚核苷酸，包括DNA适体和RNA适体。适配体因其结构的多样性而具有靶分子广、亲和力高、特异性强等特点，同时，相比传统抗体，适配体分子量小、易改造修饰、制备方便且无免疫原性。因此，适配体在基础研究、临床诊断、药物研制等方面展现了广阔的应用前景。利用这些适配体对其所结合的细胞表面的靶分子进行表征和检测，有助于发现新的生物标志物。核酸适配体已经被广泛应用于识别各种癌症靶标分子，发现新的生物标志物。