[发明专利]一种益生菌多糖复合制剂制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽用药品，更具体的说是一种增强仔猪免疫力、调节仔猪体内有益菌生长、促进仔猪生长发育的一种益生菌-多糖复合制剂及其制备方法。

背景技术

益生菌与中药分别单独作为绿色饲料添加剂已在我国广泛使用。益生菌不仅具有调节动物自身微生态平衡，增加体内有益菌群数量，抑制或杀灭有害菌，增强机体免疫力，保护生态环境等作用，而且还具有促进动物消化，提高生产性能，增强机体免疫和抗病力，改善环境污染等作用。中药含有多种营养成分和生物活性物质，不仅能够增强机体的免疫功能，提高营养物质的消化利用率，而且具有抗菌、抗病毒、副作用小和无残留等特点。但在临床实践中，益生菌由于对不良环境抗性差、在肠道中定殖困难，以及产品中活菌含量偏低等因素而影响了产品的效果；中药则由于药效发挥缓慢、某些有效成分不易被吸收、可能会抑制有益菌生长等问题而限制了其在实践中的推广。

研究表明：益生菌和中药之间存在一定的协同作用，一方面益生菌可促进中草药的吸收和利用，许多中草药本身并不是有效的药物，而是作为药物的前体，经口服后，吸收前与消化道内消化酶接触，然后经消化道下部的微生物菌群加工、改造之后才能被肠道选择性吸收；另一方面中药化学成分复杂，其中含有的生物碱、甙类、挥发油和鞣质等具有治疗作用，能为益生菌的增殖扫除障碍；油脂、树脂、糖类、蛋白质和色素等主要起营养作用，有的甚至本身就是益生菌细胞的组成成分，可以促进益生菌增殖。

李冰、王林雨等人研究表明：黄芪作为免疫增强剂和抗病毒药，在畜牧业临床具有良好的使用效果。刘阳、李树棚等人研究证明了中药黄芪有效成分对益生菌具有促生作用，黄芪多糖益生菌合生元能够明显增强雏鸡免疫功能。

发明内容

本发明将复合益生菌(猪源乳杆菌微胶囊，枯草芽孢杆菌菌粉和酵母菌粉)与以植物多糖为代表的黄芪多糖和以真菌多糖为代表的香菇多糖按一定比例混 合复配，提取纯天然、无药残、无污染、无耐药性、无毒副作用的绿色兽用药品-益生菌多糖复合生物制剂。

本发明的主要原理和技术方案：一种益生菌多糖复合制剂制备方法，在现代分子免疫学和中医学相结合的基础上，采用现代生物技术，制备益生菌制剂，后与黄芪多糖、香菇多糖按一定比例混合制取。制备方法包括以下步骤：

(1)复合益生菌制备。

①制备猪源乳酸杆菌胶囊。

将培养20h的猪源乳杆菌液在4000r/min离心20min后取菌泥；以海藻酸钠为包被壁材，以氯化钙为固化液，两者分别在121℃灭菌20min；将冷却好壁材溶液与菌液在双向恒温磁力搅拌器上混合30分钟均匀后，用注射器注入氯化钙溶液，经350r/min低速离心10min收集微胶囊颗粒，洗涤3次后取出少量样品测定包埋效率和包埋产率；其余产品置于-20℃预冻2h，然后进行冷冻干燥处理。

包埋效率/％＝(1-微胶囊表面活菌数/产品中活菌数)×100％

微胶囊表面活菌数测定：直接用生理盐水洗涤微胶囊表层菌体，进行活菌计数。

产品中活菌数的测定：将产品溶于0.1mol/L磷酸盐缓冲液(PH＝7.0)的破壁材料中，待完全溶解后进行活菌计数。

包埋产率/％＝产品中活菌数/加入的活菌数×100％。

②枯草芽孢杆菌与蜡样芽孢杆杆菌菌粉的制备

将培养18h的枯草芽孢杆菌种子液、蜡样芽孢杆菌种子液分别以4％(体积分数)接种于40L液体发酵培养基，于50L发酵罐中进行发酵培养，培养条件为：加入1.5％(体积分数)消泡剂，转速为350r/min，通气量为10L/min，初始Ph7.0，温度35℃；每隔2h取样1次，测定样品中的产芽孢率，当产芽孢率达到90％以上时即可停止发酵；将获得的发酵产物进行喷雾干燥，喷雾干燥器的进口温度设置为146℃，出口温度设置为110℃；喷雾干燥结束后测量产品质量，并利用稀释平板法测定单位质量产品中的活菌数(cfu/g)。

③复合益生菌产品的复配

将乳酸杆菌微胶囊、枯草芽孢杆菌菌粉和蜡样芽孢杆菌菌粉按照质量比3∶1∶1比例与适量碳酸钙进行混合，保证产品中的总细菌数约等于6×10¹⁰cfu/g。

(2)复合多糖制备

①黄芪多糖的提取。将黄芪根利用超微粉碎机粉碎，过300目筛绢网制备成黄芪粉，加入5-8倍的蒸馏水中，在80℃-90℃温度下浸取1-3h，过滤得浸取液，浸取液放置室温后，在适当的速度搅拌下，浸入2倍体积的95％酒精中，黄芪多糖沉淀出来，用95％酒精洗涤，干燥，得出黄芪多糖粗品。