[发明专利]辣椒叶片中类胡萝卜素组分的提取及其含量的定量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及辣椒叶片中十种类胡萝卜素组分的提取及其反相高效液相色谱含量的定量检测方法。

背景技术

辣椒(Capsicum annuum. L.)，茄科辣椒属一年生草本植物，我国在四百多年前就有栽培记录，目前栽培品种多达几十种，在全国范围内均有种植，也是北方地区冬春季节设施栽培的主要蔬菜品种，北方地区冬春季节设施栽培主要受到低温弱光的影响，进而影响辣椒产量以及品质，筛选出耐弱光性及耐低温弱光性强的辣椒品种能从根本上解决问题。

类胡萝卜素是广泛存在于自然界中的一类天然色素，结构和功能多种多样，类胡萝卜素特殊的结构赋予了它们十分特殊的性质，这些性质决定了它复杂的生物学功能。类胡萝卜素可以抑癌防衰，增强免疫；研究还表明，类胡萝卜素除了是植物进行光合作用的重要辅助色素外，还有保护光合机构免遭光破坏和抗氧化等功能。颉建明等研究表明，辣椒叶片中总类胡萝卜素的含量与品种耐弱光性及耐低温弱光性具有良好的相关关系，但是决定辣椒品种耐性的主要类胡萝卜素组分尚不明确。

八氢番茄红素(Phytoene)、番茄红素(Lycopene)、α-胡萝卜素(α-carotene)、叶黄素(Lutein) 、环氧叶黄素(Lutein epoxide)、β-胡萝卜素(β-carotene)、玉米黄素(Zeaxanthin)、单环氧玉米黄素(Antheraxanthin)、新黄质(Neoxanthin)、紫黄质(Violaxanthin)等是植物体内重要的光合色素，探明决定辣椒品种耐弱光性及耐低温弱光性的主要类胡萝卜素组分，既可通过分子生物学和基因工程，从分子水平上阐明辣椒品种的耐性机理，又可为筛选耐低温弱光性品种和种质资源提供依据，对今后辣椒育种具有重大的指导意义。

现有技术中，以石油醚为提取溶剂、皂化温度为80℃、皂化时间为40min、皂化液质量浓度为20%、皂化液体积为10mL、料液比为1：5，能够分离辣椒叶片中叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素；现有技术中还建立了以10mL80%丙酮为提取溶剂，以6mL 200g/L的KOH-甲醇溶液为皂化液，50℃皂化30min为皂化条件的提取工艺；以C18( 250mm×4.6 mm,5μm) 色谱柱，流动相为A乙腈，B乙酸乙酯，C水，波长440nm，流速1mL/min，柱温35℃为色谱检测条件的高效液相色谱检测方法；但是这些关键技术不能用于多种类胡萝卜组份的同时分离，也不利于分离后的检测。现有技术中能够建立同时分离多种类胡萝卜素组分及其含量测定方法的报道较少。现有技术中提供了小麦中类胡萝卜素含量的超高效液相色谱测定方法，该方法能够将小麦中的叶黄素与玉米黄质彻底分开，但是该方法仅限于对叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素、α-胡萝卜素，4种类胡萝卜素含量的提取与测定；现有技术中还提供一种草莓类胡萝卜素成分的含量测定方法，利用了超高效液相色谱法同时对草莓果实中叶黄素、β- 胡萝卜素、β-隐黄质以及番茄红素4种类胡萝卜素含量测定，但是局限性强。目前利用反相高效液相色谱法测定类胡萝卜素的研究还很少，现有的研究中没有一种方法适用于所有的试材，而辣椒叶片中多种类胡萝卜素组分分离及其含量测定方法目前文献报道尚未见到，更没有统一的行业测定标准。因此，建立一种能够同时分离辣椒叶片中多种类胡萝卜素，以及类胡萝卜素多种组分含量进行测定，从而为辣椒品种耐性的研究提供一种检测方法，具有重要意义。

发明内容

本发明提供了辣椒叶片中类胡萝卜素组分的提取及其含量的定量检测方法，能够对辣椒叶片中十种类胡萝卜素同时进行提取，应用反相高效液相色谱法能够将辣椒叶片中十种类胡萝卜素组分很好的分离及含量定量测定。

本发明提供辣椒叶片中类胡萝卜素组分的提取方法，步骤如下：

（1）液氮研磨：在新鲜辣椒叶片中加入液氮充分研磨至粉末状；作为优选，在研磨前还加入抗氧化剂2,6-二叔丁基对甲酚；

（2）将辣椒叶片皂化：在步骤（1）加入质量浓度为15-30%的KOH-甲醇皂化液，于40-80℃皂化20-60min；作为优选，所述KOH-甲醇皂化液的质量浓度为20%；

（3）提取：在步骤（2）制备的皂化的辣椒叶片中加入丙酮-乙酸乙酯的混合提取溶剂进行超声提取，得到类胡萝卜素粗提液；所述辣椒叶片与混合提取溶剂的比值为1g:(2-8)ml；所述混合提取溶剂中丙酮与乙酸乙酯的体积比为1:2；

（4）将步骤（3）得到的类胡萝卜素粗提液进行后处理，得到含有类胡萝卜素的溶液。