[发明专利]叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料

说明书

本发明公开一种叶酸‑牛血清白蛋白‑铂铋纳米复合材料，通过蛋白质与叶酸分子的交联，合成叶酸‑牛血清白蛋白‑铂铋纳米复合材料。叶酸‑牛血清白蛋白‑铂铋纳米复合材料在保留牛血清白蛋白‑铂铋纳米复合材料高催化活性的基础上还能够特异性识别细胞表面叶酸受体，利用3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺盐酸盐显色反应，可快速灵敏地检测表面叶酸受体高表达的肿瘤细胞。

技术领域

本发明涉及叶酸-牛血清白蛋白-纳米铂铋纳米复合材料及其制备方法，并提供一种基于叶酸-牛血清白蛋白-纳米铂铋纳米复合材料快速灵敏地检测叶酸受体高表达的肿瘤细胞的方法和检测试剂盒。属于纳米技术和生命分析技术领域。

背景技术

叶酸是一种小分子维生素，广泛分布在人体中，起重要的生理作用。自1986年科学家发现叶酸是由受体介导的内吞途径进入细胞以来，人们开始对叶酸作为靶向载体进行深入研究。专家已经证实在卵巢癌、肾癌、头颈部肿瘤、肺癌、乳腺癌、结直肠癌等恶性上皮组织来源肿瘤、关节炎部位有过表达的叶酸受体。因此，叶酸作为其靶向标记物，能够和叶酸受体进行特异性结合就能与叶酸受体特异性结合并选择性浓集于叶酸受体表达丰富的组织（肿瘤）中，如果对结合的叶酸做颜色等标记，我们便可以从各种医学显影手段上定位观察出病灶浓集的区域，并针对该区域进行治疗，其集中性、准确性对于癌症治疗的疗效提供了巨大的帮助。与其他靶向分子如单克隆抗体相比，叶酸相对分子质量小、无免疫原性、价廉易得、稳定性好、与药物或载体之间的化学键合简单易行。

生物分子复合纳米材料是在对生物矿化分子进行充分研究的基础上，利用矿化分子中的小肽和蛋白质设计和制备的无机纳米材料。利用蛋白质为模板制备的复合纳米材料在三维空间中至少有一维处于纳米尺度范围或者由该尺度范围的物质为基本结构单元所构成，其尺度已经接近光的波长并且具有大表面的特殊效应, 因此该类材料是一种典型的介观系统，具有表面效应、小尺寸效应、宏观量子隧道效应和量子限域效应。

本发明以牛血清白蛋白为模板，制备一种牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料，通过蛋白质羧基和叶酸分子的氨基进行交联反应，合成叶酸-牛血清白蛋白-纳米铂铋纳米复合材料。该纳米复合材料具有模拟过氧化物酶活性并能与叶酸受体特异性结合，可用于快速灵敏地检测叶酸受体高表达的肿瘤细胞检测。

发明内容

本发明的目的是以牛血清白蛋白为模板，制备一种牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料，以及通过蛋白质羧基和叶酸分子的氨基进行交联反应，提供一种合成叶酸-牛血清白蛋白-纳米铂铋纳米复合材料的方法。该纳米复合材料具有模拟过氧化物酶活性并能与叶酸受体特异性结合，可用于快速灵敏地检测叶酸受体高表达的肿瘤细胞检测。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明所述的一种叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料，其特征是由以下方法制备而成的：在叶酸水溶液中，加入1-乙基-3-（3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺，反应后，加入牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤管，6000 r/min离心超滤，并水洗3次，得到叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液，将叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液冷冻干燥得到叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料粉末；所述叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料具有模拟过氧化物酶活性，能催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色，并能识别细胞膜表面叶酸受体。

所述的一种叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料，其特征是在2.79 mL浓度为100 mmol/L，pH =5的磷酸盐缓冲液中依次加入1 mL浓度为2 mol/L的过氧化氢、0.2 mL浓度为16 mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐、10 μL浓度为4.76 mg/mL的叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液， 37 ℃温浴10分钟，溶液由无色变为蓝色，在652 nm处有吸收峰。