[发明专利]一种保存丛枝菌根真菌的方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及到一种保存丛枝菌根真菌的方法。

背景技术

丛枝菌根真菌(arbuscularmycorrhizafungi,AMF)是一类能与绝大部分植物的根系形 成互惠共生体的微生物，它在地球上存在了4.6亿年之久，广泛的分布在农田、森林、草地、 荒漠等各种生态系统中。丛枝菌根真菌资源丰富，从地球南极到北极都有分布；宿主多样性丰 富，全世界有380科30万种高等植物均能与其形成丛枝菌根。AMF的应用领域广泛，在农林 业生产中具有重要的意义。迄今为止，AMF尚不能完全在离体条件下纯培养，其保存方法主要 有：①盆栽培养法(Potculture)，一般采用沙、土壤等的混合基质，高梁和白三叶草为宿主 植物。是一种最为可靠与广泛的丛枝菌根真菌的保存方法；②培养基培养法(Mediumculture)， 是将宿主植物和AMF抱子在无菌培养基上共培养的方法，克服了土壤因素对培养的影响，可得 到纯度较高的无杂菌菌剂。但培养基成分要求严格，较难达到高侵染水平，无法完成大规模保 存AMF的目的；③静止营养液培养法(Restinghydroponicculture)，利用白三叶草在灭菌的 营养液中培养AMF。这种方法所需装置成本较高，实际应用中局限性较大。；④营养流动液培 养法(Nutritionflowculture)，这种方法尽管没有了土壤微生物的污染，但由于根系长期 浸泡在液体中，不利于根系和真菌的呼吸，对菌剂的繁殖速度和质量产生一定的影响；⑤汽 雾培养法(Aeroponicculture)，可在无土条件下大量生产AMF菌剂，生产的菌剂质量较高，但 雾化培养系统需要特制的喷雾培养装置，对参数要求严格的营养液，技术要求高，操作复杂， 成本较高，产量相对较少；⑥玻璃珠分室培养法(Glassbeadssplit-compartment culture)，此法得到的菌剂较为纯净，真菌和基质易于分离，培养出大量保持自然菌落的AMF， 但培养过程中养分等培养条件需要严格控制，操作繁琐，技术要求高；⑦大田培养法(Field culture)，这是生产上大面积生产菌剂的方法，可以大大降低成本，便于大面积推广应用， 但AMF仍然受多种因素的影响；⑧AMF与植物离体根器官的无菌双重培养法(Dualaxenic cultureofAMFwithRiT-DNAtransformedroot)，AMF孢子在无菌的无机矿质营养培养基 中与离体根建立共生体，即双重培养。此法排除了外界微生物的干扰，且不需要植物地上部分， 避免外因的影响。但操作复杂，制备工艺繁琐，不适于丛枝菌根真菌的大规模保存；⑨AMF 与RiT-DNA转型根的双重单胞无菌培养法(DualmonoaxeniccultureofAMFwithRiT-DNA transformedroot)，这种方法避免了人为环境条件的干扰，不破坏菌根菌丝生长可原位观察 到它的形态发育及其生理生化特性。但这种方法同样面临着操作复杂，制备工艺繁琐的问题， 并不适用于AMF的大规模保存。

对比这些丛枝菌根真菌的培养保存方法，活体宿主植物盆栽培养法是最简单、最容易、也 是最可靠的AMF保存方法。传统的活体宿主植物盆栽培养法保存丛枝菌根真菌是把植物和丛枝 菌根同时接入到土壤或者沙土基质中进行培养。采用这种方法保存丛枝菌根真菌的过程中，为 保证菌种的单一纯净，在接种菌种前都要对于栽培基质进行高压蒸汽灭菌，杀死基质中含有的 杂菌。土壤一经灭菌，不但破坏了土壤中原本微生物赖以生存的生存环境，而且削弱了土壤肥 力；相较于有机基质栽培，寄主植物生长缓慢，导致与丛枝菌根真菌的共生发生时间较长；另 外，土壤因地区不同而差异较大，且内部环境复杂，影响丛枝菌根真菌的生长及活性；而且， 天然土壤笨重，完成以土壤为基质的盆栽培养，需要大量重体力劳动。此外，该方法制备流程 繁琐，且易造成生态破坏，并不适于商业化大规模生产。

选用沙、土壤等的混合基质，以根系数量大的多年生草本植物或一年生植物做寄主植物培 养丛枝菌根真菌的报道较多，然而利用泥炭、椰糠、蛭石、珍珠岩等有机物混配作为培养基质， 以生长速度快的番茄作为寄主植物，采用穴盘育苗的方法保存丛枝菌根真菌的保存的方法尚未 见报道。

发明内容

本发明针对上述领域的空白，提供一种保存丛枝菌根真菌的方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：