[发明专利]一种新型纳米集束材料的制作方法

说明书

技术领域

本发明属于生物材料及检测技术领域，尤其涉及一种新型纳米集束材料的制作方 法。

背景技术

免疫检测一般是使用标记抗体来进行专一性的信号侦测，例如对于特殊分子标记 的定性、定量或显影，但标记抗体所携带的信号分子数量有限，以荧光为例，一般约在5个荧 光分子左右，同时也限制了荧光信号的强度、对比及动态范围。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型纳米集束材料的制作方法，旨在免疫检测限制了 荧光信号的强度、对比及动态范围的问题。

本发明是这样实现的，一种新型纳米集束材料的制作方法包括：

步骤一、在容器中溶解结构性脂质及功能性脂质于有机溶剂中；

步骤二、用旋转蒸发法将有机溶剂从容器蒸发形成脂质薄膜；

步骤三、将带有盐分的水加入薄膜中，并且在脂质的相变温度以上将其溶解；盐水包 括：5mMHEPES,135mMNaCl,pH~7.0或phosphatebufferedsaline(PBS)pH~7.4；

步骤四、将脂质溶液经由超音波或通过特定大小孔径的薄膜压缩为纳米大小的颗粒； 若以特定大小孔径的薄膜压缩，优选材质为polycarbonate而孔径为50nm,80nm,100 nm,或200nm；

步骤五、将抗体分解为片段，并取得具有专一性的片段及具有化学偶联活性的片段；获 得抗体片段优选方法为将IgG经由5mg/mlpepsin接着用200mM2-mercaptoethylamine (MEA)或500mMdithiothreitol(DTT)降解得到Fab’片段，带有活性的thiol片段，并且应 以SDS-PAGE确认所得抗体片段之分子量；

步骤六、将步骤五得到的抗体片段与脂质颗粒反应；优选的反应条件为在1摄氏度到25 摄氏度的5mMHEPES,135mMNaCl,pH~7.0溶液中。

步骤七、将脂质颗粒以化学方式交联。优选的反应条件为在15度到25度C的5mM HEPES,135mMNaCl,pH~7.0溶液中，但需考虑所使用的脂质分子总和的相变温度，优选 的条件为低于相变温度。

进一步，所述的有机溶剂为乙醇、甲醇、氯仿中的一种或几种的混合溶剂。

进一步，所述的化学方式交联为

1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide

交联方法。

本发明利用纳米材料可以在单位体积内携带大量信号分子并在其表面化学偶联 靶向性分子例如抗体或抗体片段的特性，实现免疫检测时，能将大量信号分子聚集在特定 的分子标记，而得到分析该分子标记放大信号的效果。

附图说明

图1是本发明实施例提供的新型纳米集束材料的制作方法流程图；

图2是本发明实施例提供的带有荧光分子的纳米集束与一般荧光标记的抗体标记病理 切片的信号强度对比。

具体实施方式

为能进一步了解本发明的发明内容、特点及功效，兹例举以下实施例，并配合附图 详细说明如下。

请参阅图1和图2：一种新型纳米集束材料的制作方法，包括：

S101、在容器中溶解结构性脂质及功能性脂质于有机溶剂中；

S102、用旋转蒸发法将有机溶剂从容器蒸发形成脂质薄膜；

S103、将带有盐分的水加入薄膜中，并且在脂质的相变温度以上将其溶解；

S104、将脂质溶液经由超音波或通过特定大小孔径的薄膜压缩为纳米大小的颗粒；

S105、将抗体分解为片段，并取得具有专一性的片段及具有化学偶联活性的片段；

S106、将步骤S105得到的抗体片段与脂质颗粒反应；

S107、将脂质颗粒以化学方式交联。

有机溶剂为乙醇、甲醇、氯仿中的一种或几种的混合溶剂。

化学方式交联为1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide交联方法。

如图2所示，带有荧光分子的纳米集束用于带有CD20分子标记的病理切片时，信号 强度远远高于一般荧光标记的抗体标记病理切片。