[发明专利]一种蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法

权利要求书

1.一种蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其特征在于，其是将该蛋白样品或制品进行包括去除蛋白的预处理后，加入考马斯亮蓝G-250溶液和聚山梨酯20溶液的混合液中形成混合体系，采用紫外可见分光光度计测定该混合体系的吸光度，最后用外标法定出该蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠的含量，所述外标法的外标物为氰基硼氢化钠；所述去除蛋白为将蛋白样品或制品进行煮沸；所述将该蛋白样品或制品进行包括去除蛋白的预处理为：取蛋白原液，抽取到小烧杯中，调节pH于pH5.8；将调节好的样品分装于EP管中，再将EP管架于浮漂上放入沸水中，进行煮沸；沸水浴10-20min至明显絮状沉淀，10000rpm离心10min，取上清液为供试品溶液。

2.如权利要求1所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其特征在于，所述外标法为校正曲线法。

3.如权利要求2所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其特征在于，所述校正曲线法包括氰基硼氢化钠标准梯度溶液和所述混合液的配制，然后取氰基硼氢化钠标准梯度溶液分别加入所述混合液中形成梯度标准体系，采用紫外可见分光光度计测定该梯度标准体系的吸光度，建立吸光度和浓度之间的标准曲线图。

4.如权利要求3所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其特征在于，所述混合液是考马斯亮蓝G-250溶液与体积浓度为10％的聚山梨酯20的混合液，两者配比的体积比为10:1。

5.如权利要求3所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其特征在于，所述混合体系的放置环境及时间为37℃避光水浴保存30min。

6.如权利要求3所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其特征在于，所述紫外可见分光光度计的检测波长为595纳米。

7.如权利要求6所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其特征在于，所述校正曲线法包括如下步骤：

S1.试液配制：

S11.1mol/L氰基硼氢化钠标准溶液：精确称取0.0628g氰基硼氢化钠，用1mol/LNaOH溶液溶解并稀释到1.0ml，4℃保存；

S12.氰基硼氢化钠标准梯度溶液：取1mol/L氰基硼氢化钠标准溶液用纯化水分别稀释为0.25mmol/L,0.20mmol/L,0.15mmol/L,0.10mmol/L,0.05mmol/L,0.025mmol/L溶液；

S13.考马斯亮蓝G-250溶液：取考马斯亮蓝G-250 10mg置于100ml量瓶中，加入5ml95％乙醇溶解，再加入10ml磷酸，用纯化水稀释到100ml，滤纸过滤，4℃保存；

S14.10％聚山梨酯20溶液：量取1ml吐温-20置于10ml量瓶中，纯化水稀释到10ml，4℃保存；

S15.混合液：考马斯亮蓝溶液与10％吐温-20按10：1比例，混合；

S2.检测

S21.标准曲线：取氰基硼氢化钠标准梯度溶液各0.60ml置于1.5ml离心管中，分别加入0.66ml混合液，混匀，37℃避光水浴30min，在波长595nm处测定吸光度；

S22.建立吸光度和浓度之间的标准曲线图；

所述加入考马斯亮蓝G-250溶液和聚山梨酯20溶液的混合液中形成混合体系，采用紫外可见分光光度计测定该混合体系的吸光度为：取供试品溶液0.60ml置于1.5ml离心管中，加入0.66ml染色液，混匀，37℃避光水浴30min，在波长595nm处测定吸光度。

8.如权利要求1-7任一所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其特征在于，所述蛋白为聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子或重组人粒细胞集落刺激因子。