[发明专利]一种竹叶石斛种子快速繁殖方法

说明书

本发明属于植物组织培养技术领域，公开了一种竹叶石斛种子快速繁殖方法，包括预处理阶段、种子萌发培养阶段、原球茎分化培养阶段和生根壮苗培养阶段四个阶段。本发明提供的竹叶石斛种子快速繁殖方法，在种子萌发阶段，45d即可出现大量原球茎，种子萌发率高达95％；在原球茎分化阶段，分化出小苗的时间控制在60d以内，最优可到50d；在生根壮苗培养阶段，45d左右组培苗长到3cm以上，根的条数为2条以上。从种子萌发到无菌苗生根，达到炼苗移栽要求，这一周期的时间在150d以内，大大加快了竹叶石斛种子繁殖速度，为竹叶石斛的快速生产提供了便利。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种竹叶石斛种子快速繁殖方法。

背景技术

竹叶石斛又名细叶石斛，学名Dendrobium hancockii Rolfe，是一种名贵中药，具有养阴益胃、生津止渴等功效，药用价值和经济价值极高。

此外，竹叶石斛的观赏价值极高，花姿优雅，玲珑可爱，花色鲜艳，气味芳香，被喻为“四大观赏洋花”之一，即可作切花，也可盆栽观赏。

竹叶石斛的种子非常细小，自然条件下极难萌发，而传统的分株繁殖和扦插繁殖方法速度较慢，难于满足市场需求。采用植物组织培养技术是大量繁殖种苗的有效途径，但是却未见有关竹叶石斛的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于针对上述不足，克服现有技术的缺陷，提供一种竹叶石斛种子快速繁殖方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种竹叶石斛种子快速繁殖方法，包括预处理阶段、种子萌发培养阶段、原球茎分化培养阶段和生根壮苗培养阶段；具体步骤如下：

步骤(1)、预处理阶段：竹叶石斛的成熟果荚表面依次用75％酒精、0.1wt％升汞消毒，再用无菌水处理，再将果荚浸入75％酒精，取出除去果荚表面水分，置于灭过菌的接种盘中，切开果荚，取出种子；

步骤(2)、种子萌发培养阶段：将种子接种于种子萌发培养基中萌发，培养温度为25℃～27℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为12h/d；培养40d～50d得到原球茎；所述的种子萌发培养基为1/2MS培养基；

步骤(3)、原球茎分化培养阶段：原球茎采用原球茎分化培养基进行培养，培养温度为25℃～27℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为12h/d，培养50～60d使原球茎分化出竹叶石斛小苗；

步骤(4)、生根壮苗培养阶段：原球茎分化培养阶段得到的竹叶石斛小苗采用生根壮苗培养基进行培养，培养温度为25℃～27℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间12h/d，培养40d～50d得到组培苗。

作为竹叶石斛种子快速繁殖方法进一步优选的技术方案，还包括炼苗移栽阶段：培养在三角瓶中的组培苗在自然光条件下炼苗7d后，先半打开封口膜1d，再完全开瓶炼苗2d；取出组培苗，用清水洗净组培苗根部残留的培养基，并用0.1mg/LNAA水溶液蘸根2～3min，然后移栽至木屑：草炭＝3：1的基质中，根部封土，浇透水，罩上塑料膜进行保温保湿；1周后，撤去塑料膜，并逐渐加大通风、增强光照，注意通风和温湿度的控制，湿度控制在75～90％，温度为20～28℃。1个月后成活率高达90％，完成竹叶石斛种子快速繁殖。

步骤(1)中，用75％酒精擦拭成熟果荚表面，然后用0.1wt％升汞处理10min，再用无菌水处理3-5次；再将成熟果荚浸入75％酒精中30s，取出用灭过菌的滤纸吸干果荚表面的水分，置于灭过菌的接种盘中，冷却后切开果荚，取出种子。