[发明专利]一种磷酯酰丝氨酸的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，特别涉及一种磷酯酰丝氨酸的制备方法。

背景技术

磷脂酰丝氨酸的制备方法主要有提取法和酶转化法，其中，提取法主要是从植物细胞、动物卵磷脂中提取PS，植物中的PS含量较少，所以提取法以动物的卵磷脂中提取为主，从动物的卵磷脂中提取PS主要是从动物的大脑及内脏中提取，目前，国外大部分以牛、羊、兔、马、驴等家禽的动物脑为原料来提取PS。近年来，由于疯牛病等动物疾病的原因，利用动物卵磷脂提取PS的方法的安全性受到人们的质疑。

酶转化法主要是以天然的卵磷脂为基质，加入丝氨酸，在磷脂酶的作用下，生成磷脂酰丝氨酸。现有技术中，磷脂酰丝氨酸的酶促合成多采用“有机相-缓冲液”的液液双相反应体系，通常使用氯仿、苯、丁酸乙酯、乙酸乙酯或乙醚等有机溶剂能够获得较高的反应转化率。但由于上述有机溶剂沸点很低，易燃易爆，有毒有害，容易造成环境污染，不适于工业化生产。

发明内容

为了解决现有技术中的问题，本发明提出了一种绿色环保的磷酯酰丝氨酸的制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

包括以下步骤：

（1）向反应容器内加入纯净水，水浴升温至50-60℃，并保持温度固定不变；

（2）再向容器内中加入以下重量组分的物质：磷脂酰胆碱50份，L-丝氨酸100份，氯化钙1份，搅拌1-2小时，使其充分乳化；

（3）乳化完全后再向溶液中加入20份酶，待其充分反应7-9小时，得到含有磷酯酰丝氨酸产物的混合物；

（4）向反应完成的混合物中加入正己烷，萃取磷酯酰丝氨酸，搅拌8-15分钟，待其分层，分离出正己烷溶液，再向剩余的溶液中再次加入正己烷进行进一步萃取，分离，将两次得到的正己烷溶液混合；加热正己烷溶液使其挥发，得到粗质的磷酯酰丝氨酸产物；

（5）将得到粗质的磷酯酰丝氨酸产物加入乙醇进一步去除杂质，搅拌5-7个小时后，过滤，再进行烘干后得到磷酯酰丝氨酸产品。

进一步的是，步骤（1）中，所述纯净水重量组分为200份。

进一步的是，步骤（4）中两次分别加入正己烷和步骤（5）中加入乙醇的体积比为4：1：4。

本发明的有益效果在于：本发明反应体系中采用纯净水代替传统的有机溶剂，条件温和，绿色环保，多次萃取和去除杂质，得到高纯度的磷酯酰丝氨酸，该制备方法具有高收率、短周期，低能耗的特点，适用于规模化工业生产，有效促进磷脂产业的发展。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明做详细说明。

实施例1

按照如下步骤制备：

（1）向1L三颈瓶内加入200ml纯净水，水浴升温至55℃，并保持温度固定为55℃；

（2）再向容器内中加入以下物质：磷脂酰胆碱50g，L-丝氨酸100g，氯化钙1g，搅拌1小时，使其充分乳化；

（3）乳化完全后再向溶液中加入20g酶，待其充分反应8小时，得到含有磷酯酰丝氨酸产物的混合物；

（4）向反应完成的混合物中加入200ml正己烷，萃取磷酯酰丝氨酸，搅拌10分钟，待其分层，分离出正己烷溶液，再向剩下的溶液中再次加入50ml正己烷进行进一步萃取，分离，将两次得到的正己烷溶液混合；加热正己烷溶液使正己烷挥发，得到粗质的磷酯酰丝氨酸产物；

（5）将以上粗质的磷酯酰丝氨酸产物加入乙醇进一步去除杂质，搅拌5个小时后，过滤掉乙醇，将得到的产物进行烘干得到磷酯酰丝氨酸产品33.5g，其磷脂酰丝氨酸含量为54.2％。

实施例2

按照如下步骤制备：

（1）向1L三颈瓶内加入200ml纯净水，水浴升温至50℃，并保持温度固定为50℃；

（2）再向容器内中加入以下物质：磷脂酰胆碱50g，L-丝氨酸100g，氯化钙1g，搅拌1小时，使其充分乳化；

（3）乳化完全后再向溶液中加入20g酶，待其充分反应8小时，得到含有磷酯酰丝氨酸产物的混合物；

（4）向反应完成的混合物中加入200ml正己烷，萃取磷酯酰丝氨酸，搅拌10分钟，待其分层，分离出正己烷溶液，再向剩下的溶液中再次加入50ml正己烷进行进一步萃取，分离，将两次得到的正己烷溶液混合；加热正己烷溶液使正己烷挥发，得到粗质的磷酯酰丝氨酸产物；