[发明专利]一种组培金线莲培养基及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种组培金线莲培养基及其制备方法和应用。

背景技术

金线莲(Anoectochilus roxburghii(Wall.)Lindl)是兰科开唇兰属地生型多年生草本植物，在我国主要分布于亚热带地区，即福建、广东、广西、浙江、江西、海南、云南、四川、贵州以及西藏南部等省区。金线莲是我国传统的珍贵药材，可全草入药，味甘微苦、性平微寒，具有清热解毒、润肺止咳和祛风利湿等功效，因此受到医药行业的广泛重视。由于野生资源日趋枯竭，金线莲已被列为福建省濒危药用植物加以保护。但其种子在自然条件下萌发率极低，所以利用人工繁殖对其进行抢救性的保存。目前金线莲的人工繁殖主要是靠组织培养育苗后进行大田移栽，组织培养的金线莲大都是利用植物生长激素进行调节促进其生长，然而利用生长激素来调节金线莲组织培养的传统方法是不可持续性发展的，存在成本高，影响食品安全等诸多问题，加之，在如今高速的社会发展下，绿色有机食品逐渐成为主流产品，原有的金线莲组织培养基以及培养方法，已经跟不上人们对绿色食品追求的脚步了。因此，有必要研究出一种绿色环保、无公害且能加速金线莲生长的培养基来培育金线莲，以便于达到促进金线莲快速繁殖的目的，来满足广大的市场需求，同时又能够使培育出的金线莲达到绿色有机的要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种环保、无公害且能加速金线莲生长的组培金线莲培养基及其制备方法和应用。

本发明的目的通过如下技术方案实现：一种组培金线莲培养基，包括香蕉、蔗糖、琼脂以及活性炭，它还包括0*MS～1*MS培养基母液以及食用菌罐藏加工预煮液；每1000ml所述的组培金线莲培养基包括0*MS～1*MS基本培养基母液、10～1000μL食用菌罐藏加工预煮液、10～50g蔗糖、50～250g香蕉、6g～8g琼脂、1.0g～2.0g活性炭，余量为蒸馏水，其中0*MS表示不加入基本培养基母液。

所述的组培金线莲培养基的制备，每1000毫升的有机培养基制备步骤如下：

(1)制备食用菌罐藏加工预煮液，并量取10～1000μL的食用菌罐藏加工预煮液待用；

(2)按照配制0*MS～1*MS基本培养基所需的各种母液的体积，量取MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液以及MS有机物母液待用；

(3)将步骤(1)中量取的食用菌罐藏加工预煮液与步骤(2)中量取的MS培养基母液进行混合后溶解于蒸馏水中；

(4)称取50～250g香蕉以及1.0g～2.0g活性炭，并将香蕉碾成泥后加入步骤(3)中所得的溶液中，搅拌混匀，之后加入称好的活性炭，搅拌均匀；

(5)在烧杯中加入200～300mL的蒸馏水，将蒸馏水加热至80～90℃后加入称好的6g～8g琼脂，边搅拌边加热至沸腾后琼脂溶解，待琼脂溶解之后，继续加入称好的10～50g蔗糖，边搅拌边加热至蔗糖溶解，然后将得到的琼脂与蔗糖的混合溶液加入步骤(4)所得的混合溶液中，搅拌均匀后加蒸馏水定容至1000毫升并加入酸碱调节剂将PH值调至5.0-6.0；

(6)将步骤(5)所得到的培养基分装于组培瓶中，进行高温高压灭菌，之后冷却凝固即可。

所述食用菌罐藏加工预煮液的制备方法如下：

a.收集食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水；

b.将收集来的食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水进行离心，离心机的转速控制在11500-12500rpm之间，离心温度为15-25℃，离心时间为10-20min，离心之后取上清液；

c.将所得的上清液利用降膜蒸发器，降膜蒸发浓缩，得浓缩液；

d.在浓缩液中添加变性剂，对浓缩液进行变性，其中所述的变性剂为80～100％的乙醇，且所加入的乙醇与浓缩液的体积比为2:1～6:1；

e.对变性后的浓缩液进行过滤，收集滤液；

f.将滤液进行旋转蒸发除去乙醇；

g.将旋转蒸发后所得的溶液利用5-10K的滤膜进行切向流过滤，收集滤出液；

h.将步骤g中所得的滤出液进行旋转蒸发浓缩，浓缩至溶液折光率达到35～55％即可。

步骤(5)中所述的酸碱调节剂为0.1-0.5mol/L的NaOH溶液或0.1-0.5mol/L的HCl溶液。

步骤(6)中高温高压灭菌的温度控制在121-125℃，压力控制在111-115千帕，灭菌时间为15-20分钟。