[发明专利]一种直接针对互隔交链孢酚的半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种互隔交链孢酚半抗原，其特征在于，具有如式(Ⅰ)所示的结构：

式(Ⅰ)中n＝1。

2.基于权利要求1的一种互隔交链孢酚人工抗原，其特征在于，具有如式(Ⅲ)所示结构：

式(Ⅲ)中n＝1；载体蛋白为牛血清蛋白。

3.权利要求1所述半抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将互隔交链孢酚与具有式(Ⅱ)所示分子式结构的溴代羧酸酯类化合物反应后在碱性条件下水解得到具有式(Ⅰ)所示分子结构的互隔交链孢酚半抗原：

4.根据权利要求3所述半抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.将互隔交链孢酚与具有式(Ⅱ)所示分子式结构的溴代羧酸盐按摩尔比1:1.5于适量DMF中；

S2.加入与溴代羧酸酯等摩尔数的碳酸钾，常温反应3～5h；

S3.加入适量1M的盐酸终止反应，过滤反应混合物得到白色沉淀，滤液用二氯甲烷萃取3次；

S4.将S3的白色沉淀溶于二氯甲烷中，与萃取溶液合并后过硅胶柱，用体积比为1:5乙酸乙酯/正己烷洗脱液洗脱，收集洗脱液38℃旋干，得到白色粉末状物质；

S5.上述白色粉末状物质溶于溶液体积比为1：1四氢呋喃/蒸馏水中，加适量LiOH，于碱性条件下水解12h；

S6.用1M的盐酸终止反应，乙酸乙酯萃取，萃取液旋干后过硅胶柱，甲醇：氯仿：冰乙酸＝1:30:0.01洗脱，最后蒸干的棕黄色粉末即为互隔交链孢酚半抗原。

5.权利要求2所述人工抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1所述的互隔交链孢酚半抗原溶于DMF中，搅拌加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，然后再加入载体蛋白，4℃下搅拌反应过夜；偶联混合物于4℃下生理盐水透析2天得到目标产物；所述半抗原与载体蛋白的摩尔比为100～25:1。

6.根据权利要求5所述人工抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.将5mg的互隔交链孢酚半抗原溶解于0.3mL二甲基亚砜；

S2.在S1得到的溶液中分别加入1.5倍于互隔交链孢酚半抗原摩尔质量的N，N-二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，室温避光反应过夜；

S3.将载体蛋白溶于6mL的0.01M PBS的缓冲液中，上述溶液于4℃离心，取上清逐滴加载体蛋白溶液中，并于4℃反应过夜；

S4.S3溶液反应完成后，用生理盐水透析，得到无色互隔交链孢酚人工抗原。

7.权利要求2所述人工抗原制备得到的抗体，其特征在于，包括多克隆抗体。

8.权利要求2所述人工抗原或权利要求7所述抗体在互隔交链孢酚免疫检测分析中的应用。

9.一种直接检测互隔交链孢酚的免疫分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.将权利要求2所述的人工抗原免疫动物制备互隔交链孢酚的多克隆抗体；

S2.将具权利要求2所述的人工抗原作为包被原包被在微孔板上，将步骤S1制备得到互隔交链孢酚的多克隆抗体加入微孔板中；

S3.加入待测样品，采用竞争ELISA测定待测样品中互隔交链孢酚的含量。