[发明专利]扩增DNA的方法

权利要求书

1.一种扩增细胞基因组DNA的方法，所述方法包括：

(a)提供反应混合物，其中所述反应混合物包括所述基因组DNA、第一类引物、第二类引 物、核苷酸单体混合物、和核酸聚合酶，其中所述第一类引物从5’端到3’端包含通用序列和 可变序列，其中所述通用序列由G、A、C和T四种碱基中的三种或者两种组成，条件是所述通 用序列不同时包括G和C，并且所述第二类引物包含所述通用序列且不包含所述可变序列；

(b)将所述反应混合物置于第一温度循环程序，使得所述第一类引物的可变序列能够 与所述基因组DNA配对并扩增所述基因组DNA以得到基因组扩增产物，其中所述基因组扩增 产物的5’端包含所述通用序列，3’端包含所述通用序列的互补序列；

(c)将步骤(b)得到的反应混合物置于第二温度循环程序，使得所述第二类引物的所述 通用序列能够与所述基因组扩增产物的3’端配对并扩增所述基因组扩增产物以得到扩大 的基因组扩增产物，

其中，在所述步骤(b)和所述步骤(c)之前提供所述反应混合物。

2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括分析所述扩增产物以识别与疾病或表型相 关的序列特征。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述与疾病或表型相关的序列特征包括染色体水 平异常、染色体的异位、非整倍体、部分或全部染色体的缺失或重复、胎儿HLA单倍型和父源 突变，或者所述疾病或表型选自下组：β-地中海贫血、唐氏综合征、囊性纤维化、镰状细胞 病、泰-萨克斯病、脆性X综合征、脊髓性肌萎缩症、血红蛋白病、α-地中海贫血、X连锁疾病 (由在X染色体上基因主导的疾病)、脊柱裂、无脑畸形、先天性心脏病、肥胖、糖尿病、癌症、 胎儿性别、胎儿RHD。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述基因组DNA包含在细胞中，并且所 述反应混合物进一步包含能够裂解所述细胞的表面活性剂和/或裂解酶。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中在所述步骤(b)和步骤(c)之前还包括 将所述反应混合物置于裂解温度循环程序，使得所述细胞裂解并释放出所述基因组DNA。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述通用序列被选择以使得其基本上 不会与基因组DNA结合产生扩增。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述通用序列选自下组：SEQIDNO:1、 SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、和SEQIDNO:6。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述可变序列包含随机序列。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述可变序列的长度为2-20个碱基、3- 10个碱基，4-9个碱基或5-8个碱基。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述可变序列中的三个或三个以上的 碱基位置由选自G、A和T的一种或几种碱基组成，或者由C、A和T的一种或几种碱基组成。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述三个或三个以上的碱基位置位于所述可变 序列的3’端或者中间。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述可变序列选自下组：(N)nGGG、 (N)_nTTT，(N)_mTNTNG，(N)_xGTGG(N)_y，其中N为任意的可与天然核酸进行碱基配对的核苷酸，n 是选自3-17的正整数，m是选自3-15的正整数、x和y分别是选自3-13的正整数。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述可变序列被选择以使得在基因 组上分别均匀并且覆盖度高。