[发明专利]杂交兰与西藏虎头兰杂交种子无菌播种育苗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种远缘杂交育种和杂交种子无菌播种繁殖的方法，特别指 一种杂交兰与西藏虎头兰杂交种子无菌播种育苗的方法。

背景技术

杂交兰(HybridCymbidium)是国兰与大花蕙兰种间杂交培育而成的兰花 新种类，集国兰的植株小巧、幽香、典雅和大花蕙兰的花大、色纯靓丽等特 性，花期长，有花观花、无花观叶，具有较高的观赏和经济价值，成为了近 几年来年宵及日常消费市场的新宠，消费份额逐年增长，市场潜力巨大。

西藏虎头兰(CymbidiumtracyanumL.)是兰科兰属附生类多年生草本植 物。原产我国贵州西南部、四川、云南西南部至东南部和西藏东南部，缅甸、 泰国也有分布，现广泛栽培。叶长碧绿，花姿粗旷，色彩鲜艳，花型整齐且 质地坚挺，经久不凋，具香味，抗逆性强，是世界著名的兰花新星。

兰属(Cymbidium)的种间远缘杂交存在亲和障碍，种间杂种胚通常发育 不良、无胚乳，杂交种子在自然条件下萌发困难，不易成苗，通过无菌播种 人工培养，能够在短期内获得大量幼小植株。然而不同杂种胚的萌发差异较 大，直接影响了兰属种间远缘杂交育种效率。近年来，国内已有部分兰属种 间杂交研究的报道，但建立的技术重复性差。因此，深入研究不同类型兰属 植物种间杂交种子的萌发与发育特性，将为进一步开展兰属新品种培育奠定 基础。

鉴于消费者对“新、奇、特、香”兰花新优品种的追求，培育更多具有自 主知识产权的兰花新品种是植物育种界研究的一个热门课题。

发明内容

本发明要解决的技术问题，在于提供一种杂交兰与西藏虎头兰杂交种子 无菌播种育苗的方法。

本发明是这样实现的：一种杂交兰与西藏虎头兰杂交种子无菌播种育苗 的方法，包括以下步骤：

(1)人工授粉：以杂交兰‘台北小姐’为母本，西藏虎头兰为父本进 行杂交，取母本开花后2～4d的花朵，用消毒过的镊子去除唇瓣及柱头上的 花粉块，取父本完全张开的花朵的花粉块置放于母本柱头蕊腔内；剪取授粉 205d后未开裂的成熟蒴果进行无菌播种；

(2)果荚预处理与种子播种：

将成熟蒴果进行预处理，然后将成熟蒴果的种子播种于萌发培养基中； 所述萌发培养基为1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+活性炭 1.0g/L+琼脂5.8g/L；

(3)种子萌发：将种子接种于所述萌发培养基中培养，培养温度为25 ±2℃，光照强度1200Lux±100，光照时间12h/d；

(4)根状茎的增殖与分化培养：选择生长状态相近的种子萌发形成的根 状茎，在无菌条件下分切成长0.6～0.8cm的切段，接种于1/2MS+6-BA 2.0mg/L+NAA1.0mg/L+香蕉泥80g/L+蔗糖20g/L+活性炭1.5g/L+琼脂5.8g/L 的增殖与分化培养基中培养，培养温度25±2℃，光照强度1500Lux±100， 光照时间12h/d；

(5)壮苗生根培养：将根状茎分化形成的2.5～3.5cm的幼苗小心切下， 分选后剪除老根，仅留1～2条短嫩新根，接种于MS+6-BA1.0mg/L+NAA 2.0mg/L+蔗糖25g/L+香蕉泥100g/L+活性炭2.5g/L+琼脂5.8g/L的生根壮苗培 养基中培养，培养温度25±2℃，光照强度1500Lux±100，光照时间12h/d；

(6)炼苗移栽：待生根苗长至6.0～7.0cm、叶片3～4片、根3～4条 时，将瓶苗从培养室移至温室大棚，进行炼苗，继续生长30d，温室大棚遮 光率60％，温度保持25±2℃，空气湿度保持60％～70％；

出瓶种植前3～5d，打开瓶盖适应外界环境，然后取出小苗，洗净根部 培养基，用50％多菌灵可湿性粉剂1000倍稀释溶液浸泡3min，阴凉处自然 晾干后种植于发酵过的基质中，用恶霉灵溶液喷灌植株及植料；2d后浇透 水，以后按预定周期进行叶面喷水和喷洒0.1％多菌灵杀菌剂。

进一步地，所述步骤(2)中，将成熟蒴果进行预处理的具体方法如下：