[发明专利]一组用于肠癌早期诊断的NDRG4基因甲基化检测引物和探针及其试剂盒

权利要求书

1.一组用于肠癌早期诊断的NDRG4基因甲基化检测引物和探针，其特征在于，所述引物 为NDRG4-1FP和NDRG4-1RP，其核苷酸序列分别如SEQIDNO.1和2所示；所述探针为NDRG4- 2Pb，其核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。

2.一种用于肠癌早期诊断的NDRG4基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂 盒包含有权利要求1所述引物NDRG4-1FP、NDRG4-1RP和探针NDRG4-2Pb。

3.根据权利要求2所述检测试剂盒，其特征在于，还包括利用引物NDRG4-1FP、NDRG4- 1RP和探针NDRG4-2Pb进行PCR扩增时，获得PCR模板所需试剂，所需试剂包括提取待测样品 DNA时捕获目的片段的捕获探针NDRG4-CP，捕获探针NDRG4-CP的核苷酸序列如SEQIDNO.4 所示。

4.根据权利要求2所述检测试剂盒，其特征在于，所述引物NDRG4-1FP、NDRG4-1RP和探 针NDRG4-2Pb的使用浓度均为50～500μM。

5.根据权利要求2所述检测试剂盒，其特征在于，还包括利用引物NDRG4-1FP、NDRG4- 1RP和探针NDRG4-2Pb进行PCR扩增时，PCR扩增体系试剂，包括dNTP、镁离子、反应缓冲液、 酶、无核酸酶的水。

6.根据权利要求5所述检测试剂盒，其特征在于，所述体系试剂包括5～20mM的dNTP、10 ～40mM的镁离子、1×～10×反应缓冲液、酶、无核酸酶的水。

7.根据权利要求5所述检测试剂盒，其特征在于，利用该试剂盒进行NDRG4基因甲基化 检测时，PCR体系中各组分的反应终浓度如下：

正向引物0.1～2μM

反向引物0.1～2μM

探针0.1～1μM

dNTP0.1～2mM

镁离子2～10mM

反应缓冲液1×反应体系总体积

酶0.1U～0.6U/μL

无核酸酶的水1×反应体系总体积。

8.根据权利要求5所述检测试剂盒，其特征在于，所述酶为热启动聚合酶。

9.根据权利要求2所述检测试剂盒，其特征在于，利用该试剂盒进行NDRG4基因甲基化 检测时，PCR程序如下：

95℃300s；1个循环；

95℃20s，62℃30s，70℃30s；10个循环；

95℃20s，58℃60s，72℃30s；30～40个循环；

37℃30s；1个循环。

10.根据权利要求3所述检测试剂盒，其特征在于，所述待测样品为粪便，所需试剂还包 括粪便预处理试剂，预处理试剂为研磨缓冲液。