[发明专利]一种锝标耐久霉素分子探针

说明书

技术领域

本发明属于耐久霉素分子探针技术领域，特别涉及一种锝标耐久霉素分子探针。

背景技术

细胞凋亡在肿瘤细胞对放化疗效应、心肌缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化易损斑块、 缺血缺氧性脑损伤、心、肝、肺移植排斥反应的监测以及帕金森病等的机制研究有重要 作用，而建立一种早期检测细胞凋亡的特异性影像学技术一直是一项临床难题。放射性 核素显像由于具有检测灵敏度高的优点,因此,成为发展活体凋亡检测技术的重要研究方 向。目前较成熟的凋亡探针膜联蛋白V(AnnexinV)已被多项研究证实用于凋亡检测， 放射性锝标记的AnnexinV(^99mTc–AnnexinV)存在较为明显的不足，其分子量较大 (36000Da)，血液清除速率较慢,肝脏本底十分明显。因此,注射后相对较长时间内靶器官/ 本底放射性计数比仍然不能达到最佳水平，另外AnnexinV主要与凋亡细胞中的脂酰丝氨 酸(phosphatidylserine，PS)结合，由于哺乳动物中凋亡细胞中PS远低于磷脂酰乙醇胺 (phosphatidylethanolamine，PE)，靶点的亲和力较低，限制了其在临床的实际应用。

耐久霉素(Duramycin)是由19个氨基酸构成的最小的三维结构聚肽，能以l：l的 比例与PE结合，具有较高的亲和力，并且分子量(1200Da)远小于AnnexinV(36000Da)， 靶/非靶比值高。HYNIC可作为辅助侧链来标记小分子多肽，根据以往的报道中表现出较 好的摄取和清除性质。另外,一步法标记试剂盒的合成，使得放射性核素标记简单易行, 且无需进一步纯化。因此，我们对^99mTc-HYNIC标记的Duramycin进行了进一步优化及 体内实验。

常规对Duramycin进行标记都是进行HYNIC单标记，本专利通过优化实验路线创新性 的实现了HYNIC对Duramycin的双标记，实现了最终对Duramycin进行^99mTc双放射性标记 的目标。相比传统的^99mTc单标显像剂，本专利目标产物在不改变主体分子结构的基础上 每个分子结构中含有的放射性信号提高一倍，因此明显具有更高的放射活性和比活度， 也必将极大的提高生物显像的灵敏度和分辨率，为临床科研工作提供更强大的显像手段。

发明内容

本发明的目的是提供一种锝标耐久霉素分子探针，解决了现有技术中存在的问题。

本发明所采用的技术方案为：一种锝标耐久霉素分子探针，其制备方法为以下几个 步骤：

步骤一：HYNIC对耐久霉素的修饰：

1.1.1反应液的配置：

将HYNIC(琥珀酰亚胺基-6-肼基烟酸盐丙酮腙)溶解到无水DMF(二甲基甲酰胺) 中，配置成溶液1，最终浓度为20mg/100uL；将耐久霉素溶解到无水DMF中，配置成 溶液2，最终浓度为1mg/100uL；将DIEA(二异丙基乙胺)配置成DMF溶液3，浓度 为5mg/100uL。

1.1.2HYNIC与耐久霉素的共价偶联：

于1.5mLEP管内依次加入100uL溶液1，100uL溶液2和100uL溶液3，充分混 合均匀后，避光，室温下反应15h。

步骤二：偶联产物的纯化：

利用HPLC对偶联产物进行纯化，流动相A：含有0.1％的纯净水；流动相B：含有 0.1％的乙腈。梯度洗脱条件：0-5min10％A，5-20min，10％B—90％B，20-25min90％B， 25-30min90％B—10％B，流速4mL/min，检测波长：254nm。

步骤三：偶联产物的放化标记

取100ug偶联产物HYNIC-Duramycin加入到含有100mgTricine(三甲基甘氨酸)、 32mgTPPTS(三苯基膦三间磺酸钠)和21ugSnCl的2mL水溶液中。分取其中500uL置 于2mL离心管中进行冻干备用。最后将0.5mL活度大于50mCi的^99mTc加入到上述备用 离心管中80℃反应30分钟即可。

进一步的，所述步骤二中，梯度洗脱条件为：0-5min10％A，5-20min，10％B—90％ B，20-25min90％B，25-30min90％B—10％B，流速4mL/min，检测波长：254nm。