[发明专利]一种基于HPLC的青钱柳中黄酮类化合物含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用高效液相色谱法(HPLC)测定植物体中黄酮类化合物药物的方法，尤其涉及一种基于HPLC的青钱柳中黄酮类化合物含量的检测方法。

背景技术

青钱柳是双子叶植物纲(Dicotyledoneae)胡桃科(Juglandaceae)青钱柳属植物，是我国独有的单种属植物，也是国家重点保护的濒危植物之一。《中国中药资源志要》记载，青钱柳叶具清热消渴解毒之功效。现代科学实验发现青钱柳叶含多糖、三萜、皂苷、黄酮等多种重要药效成分，能增强人体免疫力，抗氧化，抗衰老，保肝脂肪肝，具有独特作用，尤其对糖尿病人群有显著降血糖的功效。目前青钱柳主要以保健茶的形式在市场上销售，对于其质量缺乏有效的控制方法。

发明内容

发明目的：青钱柳中黄酮类化合物以槲皮素与山柰素为主，本发明的目的是提供一种能有效控制产品质量的基于HPLC的青钱柳中黄酮类化合物的含量检测方法。

技术方案：为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种基于HPLC的青钱柳中黄酮类化合物的含量检测方法，该方法包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：精密称取槲皮素对照品和山柰素对照品适量，以80％甲醇为溶剂制备成每1ml分别含10μg槲皮素和20μg山柰素的对照品混合溶液，；

(2)供试品溶液的制备：精密称定青钱柳粉末1.5g，置具塞锥形瓶中，精密加80％甲醇50ml，密塞，称定重量，置热水浴中加热回流1h，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取滤液25ml，精密加入盐酸5ml，摇匀，置热水浴中加热回流1小时，取出，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用80％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

(3)用高效液相色谱法测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液按照体积比60∶40为流动相；检测波长为360nm；流速为1.0ml/min；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500；测定时分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。

优选地，步骤(2)中，加热回流的水浴温度为85～95℃。

优选地，在步骤(2)中迅速冷却是用流动水冲洗回流用容器外壁，并不断摇晃。

有益效果：与现有技术相比，本发明通过对供试品进行特殊制备，然后用高效液相色谱法采用合适的色谱条件对青钱柳叶中的黄酮类化合物槲皮素与山柰素进行含量测定，能提高重现性，同时使检验结果更加可靠，从而能更好的控制产品质量。

附图说明

图1为槲皮素标准曲线；

图2为山柰素标准曲线；

图3为混合对照品图谱；

图4为供试品图谱。

具体实施方式

下面通过实施例来进一步阐述本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

1、仪器与试药

1.1仪器：高效液相色谱仪，电子天平，恒温水浴锅

1.2试剂：甲醇、磷酸为色谱纯，水为纯化水，其他试剂为分析纯。

1.3对照品：槲皮素，批号(100081-200907)，山柰素，批号(110861-200808)，由中国药品生物制品检定所提供；精密称取槲皮素对照品和山柰素对照品适量，加80％甲醇制成每1ml含10μg和20μg的对照品混合溶液。

1.4供试品：青钱柳药材，购自福建龙岩地区

对于青钱柳的质量控制标准为：青钱柳中黄酮类化合物以槲皮素与山柰素的总量计，每1g不得少于3.4mg。

2、色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.4％磷酸溶液(体积比60∶40)为流动相；检测波长为360nm；流速为1.0ml/min；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500；

3、供试品制备方法中提取溶剂的确定试验：

取本品粉末1.5g，共6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，2份为一组，共3组，3个组分别加入60％甲醇、80％甲醇、甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量，用同浓度甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密吸取续滤液25ml，加盐酸5ml，90℃水浴回流1小时，取出，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用同浓度甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。用上法测得各样品中槲皮素和山柰素平均总含量，结果见表1

表1：不同溶剂提取的比较试验