[发明专利]一种检测CYP19A1基因多态性的引物及其方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种检测CYP19A1基因多态性的引物及 其方法。

背景技术

多药耐药基因(MDR1)编码P-糖蛋白（P-gp），它是人体药物转运中最重要的转运 体，能主动将疏水性抗肿瘤药物泵出胞外，从而减少细胞内药物浓度。几乎所有的肿瘤，包 括各种实体瘤、白血病、淋巴瘤等均有MDR1表达。

芳香化酶是细胞色素P450酶超家族成员，编码基因为CYP19A1，可催化睾酮、雄烯 二酮向雌酮、雌二醇转化，在雌激素生物合成中起最终的限速催化作用。芳香化酶抑制剂 （AIs）通过抑制芳香化酶，使雌激素水平下降，从而消除雌激素对肿瘤生长的刺激作用。绝 经后妇女的雌激素主要来源于雄激素前体物质在外周组织的芳香化，故该类药物主要用于 自然绝经或人工绝经后的乳腺癌患者。阿那曲唑、来曲唑（第三代非甾体类AIs）对芳香化酶 的抑制程度可达99％以上。

临床研究证实，CYP19A1基因多态性对芳香化酶抑制剂在乳腺癌的治疗效果有着 很大的影响作用。在接受来曲唑治疗的绝经后激素受体阳性转移性乳腺癌患者，携带 CYP19A1基因rs4646G＞T突变患者的的疾病进展时间比正常者明显延长。因此，CYP19A1 3’-UTRrs4646G＞T是乳腺癌患者接受芳香化酶抑制剂治疗疗效的有效预测指标。

因此，检测CYP19A1基因的多态性，可以有效的预测绝经期晚期乳腺癌患者接受芳 香化酶抑制剂的治疗疗效；同时还可以预测多种抗肿瘤药物与免疫抑制剂疗效及不良反应 风险，具有重要的临床价值。

中国专利CN101781684B公开了CYP19A1基因SNP检测液相芯片及检测方法，所述液 相芯片包括有针对CYP19A1基因的SNP位点分别设计的野生型和突变型特异性ASPE引物，每 种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端的针对目的基因SNP位点的特异性引物序列组成。该检 测方法检测特异性好，可以实现多个SNP位点的并行检测。但是，上述检测操作繁琐，不利于 大规模的推广和应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测CYP19A1基因多态性的引物及其方法，该引物主 要用于检测CYP19A1基因c.*161T>G(SNP:rs4646)位点，具有特异性好、灵敏度高、准确性好 等优点，为CYP19A1基因多态性提供了一种简单有效的检测方法。

本发明提供了一种检测CYP19A1基因多态性的引物，包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；所述PCR扩增引物为：针对CYP19A1_rs4646的上游引物5’- TCAAACTCTTGGCCTCTGCTTT-3’（SEQIDNO.1）和下游引物5’-TGGCCCATGGCATTTTATAGG-3’ （SEQIDNO.2）；所述SNaPshotPCR引物为：针对CYP19A1_rs4646的SNaPshotPCR引物5’- TTTTTTTTTTTTTTTTCTATGGGTTGTCACCAAGCTAGGTGCTATT-3’（SEQIDNO.3）。

另外，本发明提供一种检测CYP19A1基因多态性的方法，包括如下步骤：

S1提取DNA样品；

S2以步骤S1提取的DNA样本为模板，采用权利要求1中所述的PCR扩增引物进行多重PCR 扩增，并对扩增产物进行纯化；

S3以步骤S2纯化后的PCR扩增产物为模板，采用权利要求1中所述的SNaPshotPCR引物 进行SNaPshotPCR扩增，并对SNaPshotPCR扩增产物进行纯化；

S4采用毛细管电泳技术进行检测，对检测结果进行分析，确定SNP位点及其基因型。

进一步地，所述步骤S1中的DNA样品为EDTA抗凝外周血的DNA样品。

进一步地，所述步骤S2中的多重PCR扩增反应条件包括：阶段1：98℃3min；阶段2： 98℃10s；阶段3：58℃30s；阶段4：72℃1min；阶段5：返回到阶段2，29个循环；阶段6：72℃ 5min；阶段7：25℃保温。

进一步地，所述步骤S3中的SNaPshotPCR扩增反应条件包括：阶段1：96℃10s；阶 段2：55℃5s；阶段3：60℃30s；阶段4：返回到阶段1，25个循环；阶段5：4℃保温。

进一步地，所述步骤S4中采用GENEMAPPERIDV4.1软件对检测结果进行分析。