[发明专利]一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于分析测试领域，更具体涉及一种测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧 基姜黄素和姜黄素含量的UPLC-TUV方法，它适用于测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧 基姜黄素和姜黄素的含量。

背景技术

姜黄素，别名姜黄色素，包括双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素，具有保 护肠粘膜、抗氧化、抗炎、抑菌、降血脂、保肝、利胆等药理活性，3种成分的生理活性也 有所不同，姜黄素的抗氧化活性大于去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素，去甲氧基姜黄素 降血脂的活性明显高于姜黄素，双去甲氧基姜黄素在利胆及对内皮细胞生长的抑制作用方面， 较去甲氧基姜黄素和姜黄素活性强。有研究表明，姜黄素在促进鱼类生长、提高鱼类消化酶 活性和抗氧化力、增强免疫功能及改善肌肉品质和鱼体色泽方面具有一定作用：在鱼饲料中 添加姜黄素可显著提高罗非鱼、虹鳟和草鱼的抗氧化能力；姜黄素可以促进大黄鱼的生长、 增强大黄鱼皮肤与肌肉的着色；饲料中添加姜黄素可以显著提高草鱼肠道中蛋白酶和淀粉酶 的活性，促进鱼体对营养物质的吸收；饲料中添加4％～6％的姜黄素还能够预防鱼肠炎病、小 瓜虫病、赤皮病等疾病。由此可见姜黄素作为添加剂在鱼饲料中使用具有较好的应用前景和 实用性，为有效测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素3种成分各自的 含量，建立一种有效的方法测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含 量是非常必要的。

目前，国内外未见有关鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素含量测 定方法的报道或申请专利。

发明内容

本发明目的是在于提供了一种测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜 黄素含量的方法。该测定方法所用试剂价格便宜，操作方便快捷，测定方法的准确性和灵敏 度高，分析时间短。适于快速准确测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、甲氧基姜黄素和姜黄素 的含量。

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：

一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法，其步骤是：

A、鱼饲料(通威黄颡鱼配合饲料1号)中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄 素采用试剂A(15-30mL)提取，经旋转蒸发仪(予华YRE2000E)将试剂挥干；

B、再经试剂B(1～10mL)复溶旋转蒸发后的残渣，将复溶溶液转移到一支10mL塑料 离心管中置40℃氮吹仪(大森DS-K200型)上氮吹至干，向10mL塑料离心管中加入1mL 定容溶液C溶解塑料管中的残渣；

C、再加入1mL试剂D，涡旋振荡30s，7000r/min离心5min，将上层液体弃去；

D、用1mL注射器吸取下层液体过0.22μm聚醚砜水系滤头，过滤液(溶解有双去甲氧 基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的溶液C，1mL)放置到2mL进样瓶(Waters，12×32mm， 带盖)中，超高效液相色谱紫外法(UPLC-TUV)测定。获得双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜 黄素和姜黄素的色谱图，通过色谱图积分得出双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素 的峰面积。

E、超高效液相色谱紫外法(UPLC-TUV)条件：流动相的有机相为试剂A，水相为溶 液E，试剂A与溶液E的两者的体积比为1:1～2:3，流速为0.3mL/min，柱温为30℃，检测波 长为430nm，色谱柱：超高效液相色谱柱ACQUITYUPLCBEHC18(100mm×2.1mm，1.7μm)， 进样量为5.0μL。采用鱼饲料基质标准曲线方程计算鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基 姜黄素和姜黄素的含量。获得双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的色谱图，通过 色谱图积分得出双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的峰面积，再将峰面积代入鱼 饲料基质标准曲线方程，计算出鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含 量。