[发明专利]一种白介素6的检测方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种白介素6的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)探针垫的制备：在荧光胶乳微粒溶液中加入活化剂反应，离心、洗涤后得到活化的荧光胶乳微粒；

将白蛋白和羊抗兔IgG分别与活化的荧光胶乳微粒偶联反应，得到白蛋白荧光胶乳微粒和羊抗兔IgG荧光胶乳微粒；将白蛋白荧光胶乳微粒溶液加入活化剂反应，离心、洗涤后得到活化的白蛋白荧光胶乳微粒；

将白介素6单克隆抗体与活化的白蛋白荧光胶乳微粒偶联反应，得到白介素6单克隆抗体荧光胶乳微粒；

将白介素6单克隆抗体荧光胶乳微粒与羊抗兔IgG荧光胶乳微粒混合得到混合荧光胶乳微粒，随后用荧光探针微球稀释液稀释，均匀喷在玻璃纤维上，烘干得到探针垫；

2)免疫层析试纸条的制备：将样品垫、探针垫、硝酸纤维素膜、吸水纸依次贴在PVC衬板上，将白介素6单克隆抗体和兔IgG分别包被在硝酸纤维素膜的检测线和控制线上，经干燥、切割后得到免疫层析试纸条；

3)样品稀释液的制备：样品稀释液为含有白蛋白、表面活性剂、分散剂和防腐剂的缓冲液；

4)样品检验：取待检测的血清、血浆或全血样品加入至样品稀释液中，待混合均匀后加入至免疫层析试纸条上进行免疫层析反应；随后在荧光检测器下采用与荧光胶乳微粒相对应的发射光波长进行荧光检测。

2.根据权利要求1所述的一种白介素6的检测方法，其特征在于：所述步骤1)中，在发射光波长为500nm～590nm的带有羧基或氨基的荧光胶乳微粒溶液中加入活化剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺，室温下反应0.5h～2h，离心、洗涤后得到活化的荧光胶乳微粒，其中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基硫代琥珀酰亚胺的重量比为1:6～1:1，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与荧光胶乳微粒的重量比为1:100～5:100；优选的，所述步骤1)中，在发射光波长为500nm～590nm的带有羧基或氨基的荧光胶乳微粒溶液中加入活化剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺，室温下反应1h，离心、洗涤后得到活化的荧光胶乳微粒，其中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基硫代琥珀酰亚胺的重量比为1:3，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与荧光胶乳微粒的重量比为1:100。

3.根据权利要求1所述的一种白介素6的检测方法，其特征在于：所述白蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、羊血清白蛋白和鼠血清白蛋白中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的一种白介素6的检测方法，其特征在于：所述步骤1)中，白蛋白与活化的荧光胶乳微粒的混合比例为0.05:100～0.2:100，混合后室温下偶联反应1h～5h，得到白蛋白荧光胶乳微粒；羊抗兔IgG与活化的荧光胶乳微粒的混合比例为0.05:100～0.2:100，混合后室温下偶联反应1h～5h，得到羊抗兔IgG荧光胶乳微粒；白介素6单克隆抗体与活化的白蛋白荧光胶乳微粒的混合比例为0.05:100～0.2:100，混合后室温下偶联反应1h～5h，得到白介素6单克隆抗体荧光胶乳微粒；优选的，所述步骤1)中，白蛋白与活化的荧光胶乳微粒的混合比例为0.12:100，混合后室温下偶联反应3h，得到白蛋白荧光胶乳微粒；羊抗兔IgG与活化的荧光胶乳微粒的混合比例为0.12:100，混合后室温下偶联反应3h，得到羊抗兔IgG荧光胶乳微粒；白介素6单克隆抗体与活化的白蛋白荧光胶乳微粒的混合比例为0.12:100，混合后室温下偶联反应3h，得到白介素6单克隆抗体荧光胶乳微粒。

5.根据权利要求1所述的一种白介素6的检测方法，其特征在于：所述步骤1)中，按2:1～6:1的比例混合白介素6单克隆抗体荧光胶乳微粒和羊抗兔IgG荧光胶乳微粒，得到混合荧光胶乳微粒，将混合荧光胶乳微粒用荧光探针微球稀释液稀释2～6倍，以2μl/cm～6μl/cm的速度均匀喷在宽度为0.7cm～1.3cm的玻璃纤维上，在37℃下干燥2h～6h得到探针垫。

6.根据权利要求1所述的一种白介素6的检测方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述荧光探针微球稀释液为包括蔗糖、牛血清白蛋白和表面活性剂的缓冲液；所述缓冲液包括PBS缓冲液、Tris缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或几种，所述表面活性剂为吐温20或吐温80。