[发明专利]一种白芨共生菌的培育方法

权利要求书

1.一种白芨共生菌的培育方法，步骤如下：

（1）白芨块茎根的消毒处理：取新鲜野生白芨块茎根部用清水冲洗3～5次除去泥砂杂质，用洗衣粉水浸泡15～25min后，用无菌水冲洗4～5次，然后用75%乙醇浸泡25～30s后，用无菌水冲洗3～5次，用0.1～0.2%HgC1₂浸泡6～8min后无菌水冲洗5～6次，用无菌滤纸吸干水分；

（2）白芨共生菌的提取：将步骤（1）消毒处理后的白芨块茎根在超净工作台上用经消毒的剪刀剪成长0.2～0.5cm小段，接入灭菌后的PDA培养基上，在24～26℃温度下暗培养，接种后7～8天获得长满整个培养基表面3～4cm长的白芨共生菌；

其特征是，还有如下步骤：

（3）白芨共生菌的提纯：将试管截去底部，管内中间装入木屑和阔叶树树叶配制的培养基，两端加棉塞灭菌后，从一端接入步骤（2）提取得到的菌丝体后，在24～26℃温度下暗培养，菌丝吃料后向木屑深处延伸至另一端，15～20天后从另一端获取纯化菌种；

（4）白芨共生菌的复壮：将步骤（3）得到的提纯菌种转接到灭菌后的RM改良培养基上，在24～26℃温度下暗培养， 7～8天后得到菌丝健壮的优良菌种；所述的复壮用RM改良培养基配方为：蛋白胨2克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾0.46克，磷酸氢二钾1克，硫酸镁0.5克，琼脂15～20克，马铃薯200克，蒸馏水1000毫升；

（5）白芨共生菌的原种扩繁：将原种培养基装入玻璃培养瓶容积的2/3后，盖上棉塞灭菌后接入步骤（4）得到的复壮菌种，在24～26℃温度下暗培养，25～30天后菌丝长到瓶底，得到白芨共生菌的原种，原种培养基的质量百分比为：杂木屑39%，阔叶树树叶39%，麸皮20%，蔗糖1%，碳酸钙1%，料水质量比为1:1.3～1.5；

（6）白芨共生菌的栽培种扩繁：将栽培种培养基装入高密度低压聚乙烯塑料袋内灭菌，冷却后接入步骤（5）得到的白芨共生菌的原种，在2～23℃温度下暗培养，28～36天后得到白芨共生菌的栽培种，栽培种培养基的质量百分比为：杂木屑30%，阔叶树树叶48%，麦麸皮10%，玉米粉10%，蔗糖1%，石膏粉1%，料水质量比为1:1.3～1.5。

2.根据权利要求1所述的白芨共生菌的培育方法，其特征是白芨共生菌的提纯培养基的质量百分比为：杂木屑60%，阔叶树树叶30%，麸皮8%，蔗糖1%，石膏粉1%，料水质量比为1:1.3～1.6。