[发明专利]一种产麦角甾醇内生真菌及其应用

说明书

本发明涉及微生物技术领域，具体是一种内生真菌在制备麦角甾醇中的应用，所述的内生真菌是从唇形科鼠尾草属植物丹参植物活体中采用内生真菌分离纯化技术分离获得的，分类命名为球状茎点霉D14(Phoma glomerata)，保藏编号为CGMCC No.11305。本发明通过内生真菌菌株液体发酵，产生了麦角甾醇。本发明的丹参内生真菌是寻找麦角甾醇新资源的重要微生物，具有较大的应用价值。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体地说，是一种产麦角甾醇的内生真菌及其应用。

背景技术

维生素D2是哺乳动物生长发育所必需的脂溶性维生素，其主要生理功能是调节体内钙磷代谢。在医药工业上，维生素D2是预防和治疗佝偻病、龋齿及老年骨质疏松症的重要药品。麦角甾醇存在于酵母和一些植物中，是脂溶性维生素D2的前体，在紫外线照射下，转化为维生素D2。从酵母细胞中提取麦角甾醇，然后用紫外线照射是生产维生素D2的主要方法。此外，麦角甾醇还是一种重要的医药化工原料，可用于“可的松”、“黄体酮”等药物的生产。自从Tanret首次从麦角中分离到麦角甾醇以来，研究者们试图通过生物技术方法获得麦角甾醇，随后便开始了对其分离、测定和高产菌株选育等方面的研究。目前，国内外用于生产麦角甾醇的酵母菌种主要采用以下选育方法获得：

一是自然选育，对不同酵母菌种进行筛选，从中选出细胞麦角甾醇含量相对较高的菌种用于生产。

二是采用细胞杂交选育技术，将细胞麦角甾醇含量较高的酵母细胞与细胞生物量高的酵母细胞进行杂交，从杂交子代中筛选细胞生物量和细胞麦角甾醇含量都较高的杂交子代菌株。

三是采用诱变育种技术。由于常规的物理、化学等方法诱变随机性较大，麦角甾醇高产菌的筛选又无快速简便的初筛手段，且麦角甾醇含量测量非常费时，所以诱变育种的菌株选育工作量非常大。

四是原生质体融合技术。此方法可以突破杂交法的一些局限性，使具有不同优良性状的单倍体菌株进行融合，获得优于亲本的融合子。

中国发明专利ZL 200410032719.X公开了一株产麦角甾醇酵母工程菌及其选育方法与应用，是啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ZGFH－88CGMCC No.1117，其选育方法包括：1)以啤酒酵母染色体DNA为模板，进行PCR扩增，得到编码甾醇C－24(28)还原酶的ERG4基因；2)将PCR扩增得到的ERG4基因连接到载体质粒上，构建含有ERG4基因的重组质粒；3)用重组质粒转化酵母菌株，筛选转化子，获得高产麦角甾醇的酵母工程菌株。发明所提供的生产麦角甾醇的方法，是对产麦角甾醇啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ZGFH－88CGMCC No.1117进行发酵，获得麦角甾醇。发酵培养条件简单，成本低廉，麦角甾醇产量高，具有实用性强、操作简便等优点，易于普遍推广，具有广阔的实际应用前景。中国专利文献CN104694401A公开了一种麦角甾醇5,8过氧化物的生产用菌株，该菌株LPPV001为纯绿青霉Penicillium verrucosum，保藏号为CGMCC NO.4468，可以通过发酵产生麦角甾醇5,8过氧化物且产率极高，经简单提纯即可得到麦角甾醇5,8过氧化物纯净物。

但是关于一种能够通过微生物发酵产生麦角甾醇的丹参内生真菌及其应用目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够通过微生物发酵产生麦角甾醇的内生真菌及其应用。

本发明的第一方面，提供了一种内生真菌，命名为球状茎点霉D14(Phomaglomerata)。