[发明专利]一株重组细胞及其在制备抗人表皮生长因子受体治疗药物中的应用

说明书

本发明公开了一株重组细胞及其在制备抗人表皮生长因子受体治疗药物中的应用。本发明提供的重组细胞CHO‑K1‑EGFR‑7gRNA是将CHO‑K1‑EGFR细胞的基因组中序列表的序列6所示的DNA分子取代为序列表的序列7所示的DNA分子得到的重组细胞；CHO‑K1‑EGFR细胞的制备方法如下：将产品甲和产品乙共同导入CHO‑K1细胞；产品甲为如下(a)或(b)：DNA分子甲；(b)含有DNA分子甲的重组表达载体甲；DNA分子甲为编码序列表的序列1所示的轻链L4的DNA分子；产品乙为如下(c)或(d)：DNA分子乙；(b)含有DNA分子乙的重组表达载体乙；DNA分子乙为编码序列表的序列3所示的重链H3的DNA分子。本发明对于癌症的治疗具有重大的应用价值。

技术领域

本发明涉及一株重组细胞及其在制备抗人表皮生长因子受体治疗药物中的应用。

背景技术

近年来，治疗性抗体在临床上的应用越来越广泛。2000-2010年，抗体药物在全球生物制药中所占份额从10.5％扩张到56.41％，预计2015年全球抗体药物市场规模有望达到680亿美元。抗体恒定区缺少核心岩藻糖基化的治疗性抗体目前正处于临床研究中，它们在体外和体内都可以促进抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(antibody dependentcellular cytotoxicity,ADCC),这种生理活性引起人们广泛关注，并成为此类药物研究的热点之一。

近年出现多种基因组编辑技术，主要有：锌脂核酸酶技术(zinc fingernuclease,ZFNs)、转录激活样效应核酸酶技术(transcription activator-like effectornucleases,TALEN)与RNA导向的CRISPR-Cas9核酸酶系统。CRISPR-Cas9核酸酶系统是近年来发现并被广泛应用于真核细胞基因组编辑的一种技术。该技术利用Cas9切割靶序列形成双链断裂(DSB)，随后通过非同源末端连接(NHEJ)或同源定向修复(HDR)进而达到对靶基因序列编辑的目的。

发明内容

本发明的目的是提供一株重组细胞及其在制备抗人表皮生长因子受体治疗药物中的应用。

本发明首先保护一株重组细胞，即重组细胞CHO-K1-EGFR-7gRNA。重组细胞CHO-K1-EGFR-7gRNA是将CHO-K1-EGFR细胞的基因组中序列表的序列6所示的DNA分子取代为序列表的序列7所示的DNA分子得到的重组细胞；所述CHO-K1-EGFR细胞的制备方法如下：将产品甲和产品乙共同导入CHO-K1细胞，得到CHO-K1-EGFR细胞；所述产品甲为如下(a)或(b)：DNA分子甲；(b)含有所述DNA分子甲的重组表达载体甲；所述DNA分子甲为编码序列表的序列1所示的轻链L4的DNA分子。所述DNA分子甲具体可为序列表的序列2所示的DNA分子或序列表的序列2自5’末端第9-729位核苷酸所示的DNA分子或序列表的序列2自5’末端第85-726位核苷酸所示的DNA分子。所述重组表达载体甲具体可为在pcDNA-3.3载体的多克隆位点(例如HindⅢ和NotI酶切位点之间)插入所述DNA分子甲得到的重组质粒。所述产品乙为如下(c)或(d)：DNA分子乙；(b)含有所述DNA分子乙的重组表达载体乙；所述DNA分子乙为编码序列表的序列3所示的重链H3的DNA分子。所述DNA分子乙具体可为序列表的序列4所示的DNA分子。所述重组表达载体乙具体可为在pOptiVEC载体的多克隆位点(例如HindⅢ和NotI酶切位点之间)插入所述DNA分子乙得到的重组质粒。

以上任一所述重组细胞CHO-K1-EGFR-7gRNA分泌的抗体(IgG)也属于本发明的保护范围。

本发明还保护所述抗体在制备用于杀伤肿瘤细胞的药物中的应用。所述肿瘤细胞可为表皮癌细胞。所述肿瘤细胞具体可为A431细胞。

本发明还保护一种用于杀伤肿瘤细胞的药物，其活性成分为所述抗体。所述肿瘤细胞可为表皮癌细胞。所述肿瘤细胞具体可为A431细胞。